醫(yī)學免費論文:根除幽門螺桿菌對慢性胃炎和胃潰瘍組織中MIF蛋白表達的影響

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 臨床資料

連續(xù)收集胃鏡下活檢組織，由有經驗的消化科醫(yī)師在胃鏡下取材，同時進行組織學檢查，依據組織學檢查結果收集淺表性胃炎、萎縮性胃炎和胃潰瘍各40例，取健康成年人并經病理檢查無炎癥活動及Hp感染的正常胃黏膜25例。其中男78例，女62例。年齡19～72歲，平均年齡41歲。所有受試者在檢查前2周內未服用過質子泵抑制劑、鉍劑及抗生素，無服用其他藥物史，肝腎功能均正常。慢性胃炎在炎癥明顯處和胃竇、胃體各取材1塊，胃潰瘍在其邊緣和胃竇、胃體各取材1塊，立即投入40g/L多聚甲醛中固定。

1.1.2 Hp根治治療

方案為奧美拉唑20mg、阿莫西林1.0g、替硝唑1.0g，均每天2次，療程7d。停藥4周后復查14C呼氣試驗，陰性者判定為Hp根除，并同時采集胃黏膜組織做MIF檢測。

1.1.3 試劑

兔抗人MIF多克隆抗體購自美國Santa Cruze公司，SP��9001免疫組織化學染色試劑盒及DAB顯色試劑盒購自廣州中杉金橋，Warthin�瞫tarry銀染色試劑為實驗室自配。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學法

PBS代替一抗做陰性對照，已經確診的肺腺癌做陽性對照，將甲醛固定的組織經過常規(guī)脫水、浸蠟、包埋后切片，厚度為4μm，切片經常規(guī)脫蠟水化，高壓抗原修復，加100mL/L H2O2以滅活內源性過氧化物酶，加封閉用正常山羊血清工作液，加一抗(濃度1∶400)，于4℃冰箱中過夜，加生物素標記山羊抗兔IgG，加辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，DAB顯色劑顯色，蘇木素復染，MIF在細胞漿中表達，陽性呈棕黃色。

1.2.2 結果判斷

參照AXIOTIS等[4]標準，由兩位病理醫(yī)生采用盲法(獨立檢測) 在高倍鏡(×400)下讀片。每張切片隨機觀察10個不重復的視野(不足10個視野的，按實際觀察到的視野計數)，根據陽性細胞占同類細胞總數的百分率及細胞染色強度綜合判定。染色強度評分標準：不著色為0分，淺粉色或黃色為1分，粉色或棕黃色為2分，紅色或黃褐色為3分。陽性細胞所占整張片比例評分標準：陽性細胞數<10%為0分，10%～40%為1分，41%～70%為2分，>70%為3分。兩種評分相加，0～1分為(-)，2分為弱陽性(+)，3～4分為陽性(��)，5～6分為強陽性(��)。≤2分的定為陰性，>2分的定為陽性醫(yī).學全.在.線網站f1411.cn。

1.2.3 Warthin�瞫tarry銀染色法檢測Hp

切片經常規(guī)脫蠟至水，放入10g/L AgNO3水溶液，60℃避光浸染60min，完成染色后傾去浸銀液，用雙蒸水涮洗。顯影工作液配制后即刻(1min內)倒入裝有切片的玻璃皿中，室溫下避光染色2～4min，顯影至切片組織呈棕褐色，立即棄去顯影液，流水沖洗停止顯影過程，切片常規(guī)脫水至透明，光學樹脂封片，Hp在鏡下可見在金黃色的組織背景中，呈清晰黑色短棒狀或S狀。

1.3 統(tǒng)計學處理

實驗數據采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進行處理，各組間對照采用四格表資料的Pearson卡方檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

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