。ㄈ)免疫測定
利用抗原抗體反應(yīng)的原理,制備出抗細(xì)胞因子的單克隆抗體或多克隆抗體,可進(jìn)行細(xì)胞因子的免疫檢測。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)、操作簡便,缺點(diǎn)是靈敏度不夠,且不能代表活性測定的結(jié)果。從目前的國際發(fā)展趨勢來看,已研制出了高靈敏度、特異性高、高度配套的細(xì)胞檢測試劑盒,其應(yīng)用范圍正在擴(kuò)大,有良好的發(fā)展前景。
。ㄋ)功能測定與抗體抑制
為解決功能定特異性不夠,免疫測定靈敏度不夠的問題,可將兩種方法結(jié)合起來,利用各自的長處,有可能得到較為可靠的結(jié)果。在這一方法中,所用的抗細(xì)胞因子抗體必須是具有中和活性的抗體。
(五)分子雜交技術(shù)
利用分子生物學(xué)技術(shù),制備出細(xì)胞因子的基因探針,可通過分子雜交技術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子mRNA的表達(dá),這是一種高度敏感和高度特異的檢測技術(shù),目前在實(shí)驗(yàn)室研究中使用較廣,其缺點(diǎn)是操作較為繁瑣,測定結(jié)果只能代表細(xì)胞因子基因的表達(dá),而不能代表活性細(xì)胞因子的水平。
。)多聚酶鏈反應(yīng)技術(shù)(PCR)
PCR(polymerase chain reation)技術(shù)是一種高效的基因體外擴(kuò)增技術(shù),目前PCR技術(shù)已用于細(xì)胞因子的檢測中,首先將細(xì)胞因子產(chǎn)生細(xì)胞的RNA提取出來,再經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA,以cDNA為模板,在細(xì)胞因子引物的引導(dǎo)下,即可進(jìn)行PCR擴(kuò)增。這種技術(shù)是迄今最敏感的細(xì)胞因子檢測技術(shù),操作也較簡便,缺點(diǎn)與分子雜交技術(shù)類似,并且不容易對(duì)細(xì)胞因子表達(dá)水平進(jìn)行定量。