中國幽門螺桿菌研究:幽門螺桿菌感染三種檢驗方法的比較

幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp)是近年認識的一類與胃炎、消化性潰瘍等疾病有關(guān)的微生物。眾所周知，胃炎和潰瘍屬于多發(fā)常見生物。眾所周知，胃炎和潰瘍屬于多發(fā)常見病，而Hp的生長需要特殊的微需氧環(huán)境，這在一些基層實驗室較難做到。為尋求簡單、廉價而又易行的實驗方法，我們試圖用燭缸法對胃活檢標本中Hp的分離、鑒定并與尿素酶試驗和涂片鏡檢對比，報告如下。

1　對象和方法

1.1　對象

1990—04～1990—10內(nèi)蒙古蒙醫(yī)學院附屬醫(yī)院做內(nèi)鏡的所有患者，經(jīng)內(nèi)鏡檢查時均在胃竇部和球部和球部鉗取粘膜組織兩塊，放無菌小瓶內(nèi)，于30min內(nèi)送檢。

1.2　方法

①培養(yǎng)與涂片：標本采集后，立即接種于含有多粘膜素B、萬古霉素、兩性霉素B、玉米淀粉和藥用炭末的甲氧芐嘧啶（TMP)巧克力培養(yǎng)基中。標本接種后將組織塊在干凈玻片上反復涂抹作細菌涂片革蘭染鏡檢。②取另一塊組織放入40孔的酶標板孔中，每孔含尿素酶試劑100μl（0.1ml)，用透明膠布封閉，置37℃溫箱，分別于1/6h，1/3h，1/2h，1/4h，12h記錄顏色出現(xiàn)變化。變?yōu)榉奂t色者為陽性，無為化者為陰性。③生化及耐受試驗f1411.cn按幽門螺桿菌（Hp)生化鑒定常規(guī)進行。④藥敏試驗對其中30株培養(yǎng)的細菌按常規(guī)紙片法做藥敏試驗。

2　結(jié)果

本組資料計254例標本，其中直接涂片165例Hp陽性，陽性率為65.0％。在涂片上為優(yōu)勢菌，革蘭陰性，菌體有1～2個彎曲，呈X形或螺旋形，易于識別。直接尿素酶試驗陽性者170份，陽性率66.9％，從時間上看10min陽性者占40.6％，30min占84.1％，4h為97.7％，12h即100％出現(xiàn)陽性。涂片鏡檢中Hp的數(shù)量愈多尿素酶試驗出現(xiàn)陽性所要時間則愈短。254例全部進行燭法Hp培養(yǎng)，結(jié)果有132例分離出Hp，陽性率為52.0％。該菌在TMP巧克力培養(yǎng)基中生長緩慢，3d～4d時菌落里呈圓點狀，直徑0.2mm～1mm，光滑，透明，無色有光澤、邊緣整齊。生化和耐受試驗見表2。本研究所分離出的Hp對痢特靈、四環(huán)素、青霉素、氨芐青霉素敏感，對TMPf1411.cn/job/＋SMZ，多粘菌素B和奈定酸抗藥。

三種檢驗方示比較　三種方法檢出Hp陽性者173例，陽性率為68.1％。尿素酶試驗與鏡檢結(jié)果無顯著性差異（P＞0.05)，二者符合率為95.3％。尿素酶試驗與培養(yǎng)檢出率差異有顯著性（P＜0.01)，二者符合率為77.6％，（表3，4)。

表1　直接尿素酶試驗結(jié)果

表2　Hp的生化特性

表3　尿素酶試驗與鏡檢和培養(yǎng)結(jié)果比較

P＞0.05，尿素酶試驗與鏡檢X²＝0.22；P＜0.01，尿素酶試驗培養(yǎng)，X²＝11.79。

表4　三種試驗方法比較

3　討論

對254例病人的胃粘膜活標本進行細菌培養(yǎng)，直接尿素酶試驗和涂片鏡檢，共檢出Hp陽性者173例，檢出率68.1％，與國內(nèi)一些報道相符。按12h內(nèi)結(jié)果計算，尿素酶試驗對診斷Hp感染的靈敏度為98.3％，特異試為100％，與涂片鏡檢比較二者符合率為95.3％。說明尿素酶試驗和涂片鏡檢對診斷Hp感染準確可靠，快速敏感，簡便易行。Hp是微需氧菌，一般分離鑒定需要微需氧環(huán)境，由于我們無此設備，燭缸法培養(yǎng)Hp在文獻上目前尚未見報道，我們受文獻的啟發(fā)，使用燭缸法，并使其保持一定的濕度和恒定的溫度。結(jié)果分離鑒定進行比較順利，但陽性率較尿素酶試驗和涂片鏡檢低，故此，該方法有待繼續(xù)改進。本研究結(jié)果說明，燭缸法是可以用于鑒定Hp的，尤其在無微需氧設備的基層單位可應用此法。藥敏結(jié)果顯示，該菌對痢特靈、四環(huán)素、青霉素、紅霉素、慶大霉素、氨芐青霉素敏感，所以，對伴有Hp陽性的胃炎、胃十二指腸潰瘍病人應首選這藥物。

本文所做工作承蒙中國預防醫(yī)學科學院生物學流行病學研究所微生物研究室陳晶晶教授指導，分離出的Hp菌株曾送該室鑒定，復核證實，特此致謝。