本品系用流行性腮腺炎病毒減毒株接種雞胚細(xì)胞，經(jīng)培育、收獲病毒液后凍干制成。用于預(yù)防流行性腮腺炎。
1 毒種
1.1 毒種來源
應(yīng)用經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)符合疫苗制造要求的流行性腮腺炎病毒上海S79減毒株或其他減毒株。由中國(guó)藥品生物制品檢定所或衛(wèi)生部指定的其他單位保管、分發(fā)。毒種來源、減毒過程歷史應(yīng)清楚。經(jīng)純毒試驗(yàn)證明為流行性肋腺炎病毒，無外源因子污染，經(jīng)臨床觀察證明安全有效。傳代不應(yīng)超過國(guó)家檢定部門批準(zhǔn)的代數(shù)，并凍干保存于-20℃以下。
1.2 毒種檢定
由制造部門會(huì)同質(zhì)量檢定部門進(jìn)行。
1.2.1 無菌試驗(yàn)
按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。由合并的生產(chǎn)毒種批取樣不得少于總量的1%。加抗生素者，先將樣品置20～25℃增菌2～4天，再移種培養(yǎng)基。剩余的樣品分裝2小瓶，分別放30～35℃或20～25℃f1411.cn/Article/培育。檢查需、厭氧菌及霉菌，培育8天判定結(jié)果。加抗生素者，由開始增菌時(shí)算起。檢查支原體于35～37℃培育14天判定結(jié)果，陽性者不重試。
1.2.2 病毒滴定
取樣品做10倍系列稀釋，每個(gè)稀釋度病毒液接種雞胚細(xì)胞或其他適宜的傳代細(xì)胞，于適宜溫度培育8～10天判定結(jié)果（可用雞胚細(xì)胞作血吸附試驗(yàn)判定)。病毒滴度不得低于5.5LogCCID50/1.0ml。應(yīng)用病毒參考品同時(shí)進(jìn)行滴定（參考品由檢定所供應(yīng))。
1.2.3 純毒試驗(yàn)
用經(jīng)稀釋的腮腺炎抗血清與一定量的病毒液等量混合后，置37℃水浴60分鐘，接種雞胚細(xì)胞或其他適宜的傳代細(xì)胞，37℃培育7～8天判定結(jié)果。腮腺炎病毒應(yīng)完全被中和，并不應(yīng)有其他病變出現(xiàn)（抗血清參考品由檢定所供應(yīng))。
1.2.4.外源因子檢查
1.2.4.1 血吸附病毒檢查
每消化批細(xì)胞應(yīng)留5%（不少于500ml)用為細(xì)胞對(duì)照，觀察細(xì)胞病變至少14天。取其中25%培養(yǎng)瓶于第7天時(shí)用0.2%～0.5%雞、豚鼠混合f1411.cn/job/紅細(xì)胞進(jìn)行血吸附試驗(yàn)，先于4～8℃放置30分鐘后判定，如為陰性，再移至20～25℃放置30分鐘判定結(jié)果，應(yīng)為陰性。凡有可疑細(xì)胞病變或血吸附試驗(yàn)可疑陽性者，應(yīng)用同種不同批細(xì)胞進(jìn)行盲傳。
1.2.4.2非血吸附病毒檢查
在對(duì)照細(xì)胞觀察結(jié)束時(shí)，取10ml細(xì)胞培養(yǎng)合并液接種同種不同批制備種子批用的細(xì)胞，另取10ml接種人源和猴源細(xì)胞，同時(shí)各留一瓶人源和猴源細(xì)胞作對(duì)照，置35～37℃觀察14天，應(yīng)無異常。
1.2.5 免疫原性檢查
取檢定代毒種批制成疫苗，按常規(guī)接種易感兒，免疫前及免疫后1個(gè)月采血，測(cè)定血抑抗體或中和抗體，每次檢查至少要包括免前抗體陰性（＜1∶2)者20名�？贵w陽轉(zhuǎn)（免后抗體≥1∶2)率不應(yīng)低于95%，并不應(yīng)有腮腺腫大等反應(yīng)。
1.3 毒種傳代
應(yīng)按各毒株的培育條件進(jìn)行傳代，以保持其特性。疫苗所用的毒種代次應(yīng)在國(guó)家檢定部門許可范圍內(nèi)。生產(chǎn)毒種批不得通過任何傳代細(xì)胞系。
1.4 毒種保存
1.4.1必須選擇早代毒種批進(jìn)行凍干保存。
1.4.2液體毒種批需加5%～10%滅能小牛血清，置-60℃以下保存。
1.5 生產(chǎn)用毒種
檢定合格的毒種批可再傳遞10代，10代以內(nèi)只做上述1.2.1～1.2.3項(xiàng)檢定。
2 疫苗制造
2.1 細(xì)胞制備
選用來自SPF雞群的9～10日齡雞胚，經(jīng)胰蛋白酶消化分散。同一容器內(nèi)制備的細(xì)胞為1個(gè)消化批。
2.2 使用液體
生長(zhǎng)液為含適量滅能小牛血清乳蛋白水解物歐氏液或經(jīng)國(guó)家檢定部門批準(zhǔn)的其他適宜培養(yǎng)液。
2.2.1疫苗生產(chǎn)過程中不得加青霉素或其他β-內(nèi)酰胺類抗生素。
2.3 培育方法
以適量病毒接種雞胚單層細(xì)胞，置33℃培育，當(dāng)出現(xiàn)“+”病變時(shí)，傾去培養(yǎng)液，用不少于原培養(yǎng)液量的洗液洗滌細(xì)胞表面，并換以疫苗液，當(dāng)病變達(dá)+++、++++時(shí)，放2～8℃或用其他適宜方法釋放病毒。
2.4 外源因子檢查
每消化批細(xì)胞留5%（不少于500ml)作為細(xì)胞對(duì)照，觀察細(xì)胞病變至少14天，取其中25%培養(yǎng)瓶于第7天時(shí)用0.2%～0.5%豚鼠和雞紅細(xì)胞混合液進(jìn)行血吸附試驗(yàn)，先于4～8℃放置30分鐘后判定，如為陰性再移至20～25℃放置30分鐘判定結(jié)果，應(yīng)為陰性。凡有可疑細(xì)胞病變或血吸附試驗(yàn)可疑陽性者，應(yīng)用同種不同批的細(xì)胞進(jìn)行盲傳。
2.5 半成品檢定
釋放病毒后按每1培養(yǎng)瓶或合并批為1批，及時(shí)抽樣進(jìn)行檢定。
2.5.1病毒滴定
方法同1.2.2項(xiàng)。凍干前滴度不得低于4.75LogCCID50/1.0ml。
2.5.2 無菌試驗(yàn)
按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。支原體檢查與質(zhì)量檢定部門會(huì)同進(jìn)行。
2.5.3 純毒試驗(yàn)
每一消化批應(yīng)抽樣進(jìn)行純毒試驗(yàn)。方法同1.2.3項(xiàng)。
2.6 疫苗凍干
半成品檢定合格后按比例加適宜保護(hù)劑，及時(shí)進(jìn)行分裝，分裝時(shí)置冰浴中保冷，采用適宜的凍干條件進(jìn)行凍干。封口時(shí)間不得超過4小時(shí)，亦可采用其他適宜封口方法。
2.7 包裝
按《生物制品包裝規(guī)程》進(jìn)行。
3 成品檢定
3.1 物理檢查
應(yīng)為乳酪色疏松體，溶解后應(yīng)為橘紅色透明液體，無異物。
3.2 無菌試驗(yàn)
按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行，成品不做支原體檢查。
3.3 殘余水分含量
凍干疫苗殘余水分應(yīng)≤3.5%。
3.4病毒滴定及穩(wěn)定性試驗(yàn)
每批成品疫苗必須同時(shí)做病毒滴定及37℃放置7天進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)。取3～5支樣品混合滴定，方法同1.2.2項(xiàng)。疫苗滴度于37℃放置7天前后均不得低于4.0LogCCID50/1.0ml。37℃7天后滴度下降不得超過1Log。
3.5 安全試驗(yàn)
用體重14～16g小白鼠4只，每只腹腔注射0.5ml，注射后密切觀察3天，應(yīng)健存。
3.6 殘余牛血清蛋白含量測(cè)定
用檢定所認(rèn)可的試劑和方法測(cè)定，殘余牛血清蛋白含量應(yīng)≤ 50ng/ml。
4 疫苗稀釋液
滅菌注射用水，其質(zhì)量應(yīng)符合《中國(guó)藥典》規(guī)定。
5 保存與效期
應(yīng)保存于8℃以下。運(yùn)輸應(yīng)在冷藏條件下進(jìn)行。疫苗自病毒滴定合格之日起效期為1年半。
