甲、鎢酸沉淀法
1 試劑
1.110%鎢酸鈉溶液
取鎢酸鈉10g，加蒸餾水使溶解成100ml。
1.2 0.33mol/L硫酸溶液
量取化學(xué)純硫酸1.86ml，緩緩注入適量的蒸餾水中，待冷加水稀釋至100ml。
1.30.145mol/L氯化鈉溶液
取氯化鈉9g，加蒸餾水使溶解成1000ml。
2 操作
2.1 鎢酸除蛋白質(zhì)
精確量取樣品2ml加蒸餾水14ml，加10%鎢酸鈉2ml，0.33mol/L硫酸2ml，搖勻，靜置30分鐘過濾。
2.2 精確量取樣品1ml，用0.145mol/L氯化鈉溶液準(zhǔn)確稀釋至每ml含氮量1mg左右。
2.3 精確量取稀釋液1ml及除蛋白質(zhì)濾液5ml，分別移入凱氏定氮瓶中，用半微量定氮法測(cè)定樣品的總氮及非蛋白氮含量。
3 計(jì)算
樣品總氮含量(mg/ml)=（樣品滴定數(shù)-空白滴定數(shù))×標(biāo)準(zhǔn)鹽酸mol/L×14×稀釋倍數(shù)
樣品非蛋白氮含量(mg/ml)=（樣品滴定數(shù)-空白滴定數(shù))×標(biāo)準(zhǔn)鹽酸mol/L×14×12
樣品蛋白質(zhì)含量(g/ml)=（總氮-非蛋白氮)×6.25×1/10
附注
1.樣品蛋白質(zhì)含量如超過10%(g/ml)，除蛋白質(zhì)時(shí)應(yīng)適當(dāng)加大樣品稀釋倍數(shù)，10%鎢酸鈉及0.33mol/L硫酸用量相應(yīng)地按比例增加，使溶液鎢酸濃度仍保持1%。
2.總氮與非蛋白氮可用同一空白。
乙、三氯醋酸沉淀法
1 2%三氯醋酸溶液
取三氯醋酸12g，加蒸餾水溶解至100ml。
2 操作
精確量取一定體積的樣品（含蛋白質(zhì)6～12mg左右，于10ml尖底離心管中，加等體積的12%三氯醋酸混勻，放置半小時(shí)后3000r/min離心30分鐘，傾凈上清，沉淀用蒸餾水約3ml（分?jǐn)?shù)次)洗入凱氏燒瓶，按半數(shù)量定氮法測(cè)定氮含量。
3 計(jì)算
（樣品滴定數(shù)– 空白滴定數(shù))×標(biāo)準(zhǔn)鹽酸mol/L×14
樣品蛋白質(zhì)含量(mg/ml)──────────────────────×6.25
樣品ml數(shù)
丙、微量法（Lowry法)
1.試劑
1.1 4%碳酸鈉溶液
取4g碳酸鈉，加蒸餾水溶解成100ml。
1.2 0.2mol/L氫氧化鈉溶液
取0.8g氫氧化鈉加蒸餾水，溶解成100ml。
1.3 0.04mol/L硫酸銅溶液
取1gCuSO4·5H2O加蒸餾水溶解成100ml。
1.42%酒石酸鉀（或0.1mol/L酒石酸鈉)
取2g酒石酸鉀（或酒石酸鈉)，加蒸餾水溶解成100ml。
1.5 堿性銅液
臨用前取試劑1.1和1.2各25ml，試劑1.3和1.3各0.5ml混勻配制而成。
1.6 酚試劑
稱取100g鎢酸鈉(Na2WO4·2H2O),25g鉬酸鈉(Na2MoO4·2H2O)f1411.cn/Article/，置1500ml燒瓶中，加入700ml蒸餾水，50ml 85%磷酸及100ml濃鹽酸，上聯(lián)回流管（使用木塞或錫紙包裹的橡皮塞)微沸加流10小時(shí)，取下回流管，加入150g硫酸鋰，50ml蒸餾水，幾滴溴液，煮沸約15分鐘，驅(qū)除過量的溴。冷卻，加蒸餾水稀釋至1000ml，過濾，為酚試劑貯備液。
酚試劑貯備液經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉液滴定，測(cè)定酸濃度，而后用蒸餾水稀釋至相當(dāng)1mol/L鹽酸濃度，即為酚試劑。
1.7 標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液
取牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（由檢定所統(tǒng)一標(biāo)定發(fā)給)，準(zhǔn)確稀釋至1mg/ml(含0.02%NaN3)，為標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)貯備液。精確量取標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)貯備液2.5ml于25ml容量瓶中，用含0.02%NaN3的蒸餾水稀釋至刻度，為標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液（100μg/ml)。
2 操作
2.1 樣品
精確量取一定體積樣品（含蛋白質(zhì)50μg左右)于試管中，加5ml堿性銅液，混勻，于室溫放置10分鐘，快速加入0.5ml酚試劑，搖勻，于室溫放置30分鐘，用650nm波長或紅色濾光片比色（呈色后，如發(fā)現(xiàn)混濁，經(jīng)3000r/min離心15分鐘后再比色)。
2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線
精確量取標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液（100μg/ml)0、0.2、0.4、0f1411.cn/job/.6、0.8、1.0ml，分別置于試管中，加蒸餾水補(bǔ)至1ml，其余操作同樣品，可得一標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3 計(jì)算
從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出樣品相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液之ml數(shù)A；
A×0.01%
樣品蛋白質(zhì)含量（g/ml)= ────────
樣品ml數(shù)
附注
檢測(cè)A群腦膜炎多糖抗原半成品原液可取1ml（含抗原3～10mg)。
