| 公開(公告)號(hào) | CN1513985A |
| 公開(公告)日 | 2004.07.21 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN03126889.7 |
| 申請(qǐng)日期 | 2003.06.13 |
| 專利名稱 | 人胚腎293細(xì)胞亞克隆細(xì)胞株 |
| 主分類號(hào) | C12N5/10 |
| 分類號(hào) | C12N5/10;C12N15/11;C12N15/53;C12N9/02 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 張曉志;彭朝暉 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 張曉志;彭朝暉 |
| 地址 | 518057廣東省深圳市高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)園（北區(qū))郎山路賽百諾公司 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 深圳市中知專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 成義生 |
| 國(guó)省代碼 | 廣東;44 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種用于生產(chǎn)重組腺病毒制品的人胚腎293細(xì)胞亞克隆細(xì)胞株，其特征在于，該細(xì)胞株是由ATCC 293細(xì)胞經(jīng)亞克隆方法制得，它含有下列序列的人三磷酸甘油醛脫氫酶(human g1yceraldehydes-3-phosphatedehydrogenase，GAPD)：1 ctctctgctc ctcctgttcg acagtcagcc gcatcttctt ttgcgtcgcc agccgagcca61 catcgctcag acaccatggg gaaggtgaag gtcggagtca acggatttgg tcgtattggg121 cgcctggtca ccagggctgc ttttaactct ggtaaagtgg atattgttgc catcaatgac181 cccttcattg acctcaacta catggtttac atgttccaat atgattccac ccatggcaaa241 ttccatggca ccgtcaaggc tgagaacggg aagcttgtca tcaatggaaa tcccatcacc301 atcttccagg agcgagatcc ctccaaaatc aagtggggcg atgctggcgc tgagtacgtc361 gtggagtcca ctggcgtctt caccaccatg gagaaggctg gggctcattt gcagggggga421 gccaaaaggg tcatcatctc tgccccctct gctgatgccc ccatgttcgt catgggtgtg481 aaccatgaga agtatgacaa cagcctcaag atcatcagca atgcctcctg caccaccaac541 tgcttagcac ccctggccaa ggtcatccat gacaactttg gtatcgtgga aggactcatg601 accacagtcc atgccatcac tgccacccag aagactgtgg atggcccctc cgggaaactg661 tggcgtgatg gccgcggggc tctccagaac atcatccctg cctctactgg cgctgccaag721 gctgtgggca aggtcatccc tgagctgaac gggaagctca ctggcatggc cttccgtgtc781 cccactgcca acgtgtcagt ggtggacctg acctgccgtc tagaaaaacc tgccaaatat841 gatgacatca agaaggtggt gaagcaggcg tcggagggcc ccctcaaggg catcctgggc901 tacactgagc accaggtggt ctcctctgac ttcaacagcg acacccactc ctccaccttt961 gacgctgggg ctggcattgc cctcaacgac cactttgtca agctcatttc ctggtatgac1021 aacgaatttg gctacagcaa cagggtggtg gacctcatgg cccacatggc ctccaaggag1081 taagacccct ggaccaccag ccccagcaag agcacaagag gaagagagag accctcactg1141 ctggggagtc cctgccacac tcagtccccc accacactga atctcccctc ctcacagttg1201 ccatgtagac cccttgaaga ggggaggggc ctagggagcc gcaccttgtc atgtaccatc1261 aataaagtac cctgtgctca acc其中，(1)自76-1083是編碼GAPD 1-335氨基酸序列(如下所示)的基因組序列：MGKVKVGVNGFGRIGRLVTRAAFNSGKVDIVAINDPFIDLNYMVYMFQYDSTHGKFHGTVKAENGKLVINGNPITIFQERDPSKIKWGDAGAEYVVESTGVFTTMEKAGAHLQGGAKRVIISAPSADAPMFVMGVNHEKYDNSLKIISNASCTTNCLAPLAKVIHDNFGIVEGLMTTVHAITATQKTVDGPSGKLWRDGRGALQNIIPASTGAAKAVGKVIPELNGKLTGMAFRVPTANVSVVDLTCRLEKPAKYDDIKKVVKQASEGPLKGILGYTEHQVVSSDFNSDTHSSTFDAGAGIALNDHFVKLISWYDNEFGYSNRVVDLMAHMASKE(2)自1261-1266為多聚腺苷腺尾polyA。 |
| 摘要 | 一種用于生產(chǎn)重組腺病毒制品的人胚腎293細(xì)胞亞克隆細(xì)胞株，該細(xì)胞株是由ATCC 293細(xì)胞經(jīng)亞克隆方法制得，它含有人三磷酸甘油醛脫氫(human glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase，GAPD)，該細(xì)胞株由下列方法培養(yǎng)制得：a、將ATCC 293細(xì)胞(P32)復(fù)蘇后進(jìn)行細(xì)胞擴(kuò)增傳代至第33代次(P33)，然后將P33細(xì)胞懸液用FACS流式細(xì)胞儀進(jìn)行亞克隆；b、用2個(gè)96孔板，每孔中0.2ml培養(yǎng)基中放置一個(gè)細(xì)胞，在36～38℃、3～6％CO2條件下培養(yǎng)6～10天；c、挑選出細(xì)胞形態(tài)均一、生長(zhǎng)良好的、已達(dá)到不低于60％鋪滿生長(zhǎng)的克��；d、重復(fù)上述步驟四次，最后挑選出1個(gè)亞克隆的細(xì)胞柱(P37)，繼續(xù)培養(yǎng)擴(kuò)增并制成原代細(xì)胞庫(kù)(P38)，置于-80℃凍存；e、以原代細(xì)胞庫(kù)(P38)為基礎(chǔ)制備主代細(xì)胞庫(kù)及工作細(xì)胞庫(kù)。本發(fā)明應(yīng)用基因工程技術(shù)和分子克隆技術(shù)，使其具有明顯增強(qiáng)細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)的功能和細(xì)胞生長(zhǎng)倍增時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)。 |
| 國(guó)際公布 |
