公開(公告)號
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CN1161376C
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公開(公告)日
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2004.08.11
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申請(專利)號
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CN95196963.3
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申請日期
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1995.10.23
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專利名稱
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生產(chǎn)分離及純化的摩拉克氏菌的主要外膜蛋白CD的方法
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主分類號
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C07K14/22
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分類號
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C07K14/22;A61K39/02;G01N33/569;C07K16/12
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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1994.10.24 US 08/328,589
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申請(專利權(quán))人
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康諾特實(shí)驗(yàn)室有限公司
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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Y·P·楊;R·E·哈克尼斯
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地址
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加拿大安大略省
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頒證日
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2004.08.11
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國際申請
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PCT/CA1995/000604 1995.10.23
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進(jìn)入國家日期
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1997.06.20
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專利代理機(jī)構(gòu)
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中國專利代理(香港)有限公司
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代理人
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盧新華;溫宏艷
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國省代碼
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加拿大;CA
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主權(quán)項(xiàng)
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一種從產(chǎn)CD蛋白的細(xì)菌菌株生產(chǎn)分離及純化的外膜蛋白CD的方法,包括如下步驟:(a)提供此細(xì)菌菌株的細(xì)胞團(tuán);(b)將此細(xì)胞團(tuán)裂解產(chǎn)生細(xì)胞裂解液;(c)將此細(xì)胞裂解液分級分離,得到初級上清和初級沉淀,上清里含有基本上大部分可溶性細(xì)菌蛋白;(d)將所述初級上清與初級沉淀分開;(e)選擇性抽提初級沉淀,基本上去掉所有可溶蛋白和除CD蛋白以外的膜蛋白,并產(chǎn)生次級上清和包含CD蛋白的經(jīng)抽提的沉淀;(f)將此次級上清與經(jīng)抽提的沉淀分開;(g)溶解此經(jīng)抽提的沉淀得到溶解的抽提物;(h)把此溶解的抽提物分級分離,產(chǎn)生含CD蛋白的上清和應(yīng)棄掉的沉淀;然后(i)將此含CD的上清與欲棄掉的沉淀分開。
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摘要
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一種分離并純化的非變性外膜蛋白CD通過一種分離方法得到,此蛋白本身是或相當(dāng)于一種摩拉克氏菌株,特別是粘膜炎摩拉克氏菌的可分離部分。分離時(shí)把大批細(xì)菌裂解然后離心形成沉淀,并棄去包含在部分可溶蛋白的上清。此沉淀再選擇性地抽提以去掉剩下的可溶性蛋白。除CD外的其它膜蛋白和其他雜質(zhì)例如脂多糖和磷脂。剩下的包含CD的沉淀被分散和溶解,然后離心分級分離去掉余下的細(xì)胞殘?jiān)T揅D蛋白可用于診斷和免疫原性組合物,特別是在宿主體內(nèi)施用提供抗疾病保護(hù),該疾病是由于產(chǎn)生CD蛋白或另一種蛋白的細(xì)菌病原體引起的,其中該另一種蛋白可在宿主內(nèi)誘導(dǎo)特異性與CD蛋白反應(yīng)的抗體。
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國際公布
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WO1996/012733 英 1996.5.2
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