| 公開(公告)號(hào) | CN1706942A |
| 公開(公告)日 | 2005.12.14 |
| 申請(專利)號(hào) | CN200410055548.2 |
| 申請日期 | 2004.08.04 |
| 專利名稱 | 抑制血管生成及腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的Kringle變體蛋白制備方法及應(yīng)用 |
| 主分類號(hào) | C12N9/72 |
| 分類號(hào) | C12N9/72;C12N15/70;C12N15/52;A61K38/49 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 2004.6.4 CN 200410044914.4 |
| 申請(專利權(quán))人 | 南京大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 劉建寧;張 菁;陳于紅;周穎江 |
| 地址 | 210093江蘇省南京市漢口路22號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 南京天華專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 夏 平 |
| 國省代碼 | 江蘇;32 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種具有抑制血管生成及腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的尿激酶原Kringle結(jié)構(gòu)域變體蛋白的制備方法，其特征是：a.用PCR方法擴(kuò)增出編碼尿激酶原Kringle結(jié)構(gòu)域的基因片段，用NdeI和BamHI雙酶切后插入到pET29a質(zhì)粒，構(gòu)建成重組質(zhì)粒pET29a-UKK；b.通過化學(xué)合成方法合成需要替換的脫氧核糖核苷酸序列，并在兩端分別加上NcoI和PstI酶切位點(diǎn)，插入到重組質(zhì)粒pET29a-UKK，構(gòu)建成含有尿激酶原Kringle結(jié)構(gòu)域變體蛋白編碼序列的重組質(zhì)粒pET29a-mUKK；c.將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)后涂板，挑取單克隆至LB(卡那霉素抗性)中，培養(yǎng)過夜，轉(zhuǎn)接后繼續(xù)培養(yǎng)，再經(jīng)誘導(dǎo)得到菌體；d.離心收集菌體，超聲破菌，離心取上清過Ni-NTA親和柱，對洗脫液中的目的蛋白進(jìn)行復(fù)性，并用CM離子交換柱進(jìn)一步純化，獲得高純度的目的蛋白。 |
| 摘要 | 本發(fā)明屬于生物制藥領(lǐng)域中應(yīng)用基因工程技術(shù)生產(chǎn)蛋白質(zhì)藥物的范疇。本發(fā)明公開了一種新的具有抑制血管生成及腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的尿激酶原Kringle結(jié)構(gòu)域變體蛋白mUKK的制備方法和應(yīng)用。其制備方法是用基因工程技術(shù)構(gòu)建了表達(dá)mUKK的重組質(zhì)粒，并實(shí)現(xiàn)了在大腸桿菌中的高效表達(dá)，經(jīng)分離純化后獲得高純度的具有抑制血管生成及腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的蛋白質(zhì)藥物，可用于腫瘤、肥胖、糖尿病和心腦血管疾病等血管生成異常相關(guān)的疾病的治療。 |
| 國際公布 |
