| 公開(公告)號 | CN1313478C |
| 公開(公告)日 | 2007.05.02 |
| 申請(專利)號 | CN200410081443.4 |
| 申請日期 | 2004.12.10 |
| 專利名稱 | 一種快速大量提純質粒DNA的新方法 |
| 主分類號 | C07H21/04(2006.01)I |
| 分類號 | C07H21/04(2006.01)I;C07H1/06(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 四川農(nóng)業(yè)大學;王紅寧 |
| 發(fā)明(設計)人 | 王紅寧;汪 洋;周 生;胡慧瓊;余祖華;陳 萍 |
| 地址 | 625014四川省雅安市新康路四川農(nóng)業(yè)大學科技管理處 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | |
| 代理人 | |
| 國省代碼 | 四川;51 |
| 主權項 | 一種快速大規(guī)模提純質粒DNA的新方法，其方法特征在于按如下步驟操作：(1)按常規(guī)搖瓶大量培養(yǎng)細菌擴增質粒(詳見《分子克隆試驗指南》)；(2)取經(jīng)常規(guī)培養(yǎng)18-20小時的菌體，取500ml菌液，室溫以5000rpm離心10分鐘，棄上清；(3)用40ml預冷的STE重懸菌體，轉移至2支50ml離心管中，室溫以6000rpm 5分鐘，棄上清；(4)沉淀中加5ml預冷的R1，充分振蕩混勻；(5)加入10ml新鮮配制的R2，輕輕顛倒5次混勻，冰浴約10分鐘；(6)加入7.5ml預冷的R3，輕輕顛倒5次混勻，冰浴約5分鐘；(7)4℃，以12000rpm離心10分鐘，取上清至另外的50ml離心管中；(8)加入0.6倍體積的異丙醇R4，顛倒混勻，室溫放置10分鐘，4℃，以12000rpm離心10分鐘，棄上清，70％乙醇洗滌沉淀，37℃蒸發(fā)至沉淀邊緣透明；(9)加入5ml R8(TE)使之溶解；(10)加入5mlR5，取用時搖勻，室溫吸附5分鐘，12000rpm離心5分鐘，棄去離心液；(11)加入5mlR6，室溫12000rpm離心5分鐘，棄去離心液；(12)加入5ml R7，室溫12000rpm離心5分鐘，棄去離心液，室溫放置10分鐘，使之干燥；(13)用1ml R8溶解，室溫放置8分鐘(或37℃放置5分鐘)，解吸附，室溫12000rpm離心5分鐘，--20℃保存?zhèn)溆茫? |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及分子生物學研究領域，為一種簡易快速大規(guī)模提純質粒DNA的新方法。本方法所用試劑包括菌體清洗液、菌體重懸緩沖液、菌體裂解液、裂解中和液、異丙醇、硅藻土懸液、蛋白洗滌液、80％乙醇、DNA稀釋液九種試劑和50ml-l00ml離心管。本發(fā)明與現(xiàn)有提純方法比較操作簡便，一次提取僅需90分鐘。本發(fā)明結果穩(wěn)定，得量高，純度好，無蛋白質和RNA污染，與應用Qiagen柱式純化試劑盒和國產(chǎn)賽百盛樹脂型試劑盒提取相同的質粒DNA比較，所得DNA的電泳條帶同樣清晰，無RNA混雜。本發(fā)明價格低廉，不需用酚和氯仿等有毒試劑，經(jīng)放大可用于DNA疫苗的制備。 |
| 國際公布 |
