公開(公告)號(hào)
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CN1250739C
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公開(公告)日
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2006.04.12
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN01120369.2
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申請(qǐng)日期
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2001.08.23
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專利名稱
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低成癮性鎮(zhèn)痛藥物高通量篩選平臺(tái)
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主分類號(hào)
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C12Q1/04(2006.01)I
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分類號(hào)
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C12Q1/04(2006.01)I
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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段海清;張兆山
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地址
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100071北京市豐臺(tái)區(qū)東大街20號(hào)國(guó)家生物醫(yī)學(xué)分析中心
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
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代理人
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關(guān) 暢
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國(guó)省代碼
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北京;11
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主權(quán)項(xiàng)
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一種低成癮性鎮(zhèn)痛藥物的高通量篩選方法,包括以下步驟: 1)將無(wú)血清微載體培養(yǎng)的CHO衍生工程細(xì)胞株CHO-OPR8CGMCC№0613及CHO衍生工程細(xì)胞株CHO-PCGMCC№0612分別裝入層析柱中,得到CHO-OPR8層析柱及CHO-P層析柱;所述微載體培養(yǎng)是在培養(yǎng)基中加入了2-20mg/ml的大孔徑明膠微載體; 2)將待選擇的5肽庫(kù)和15肽庫(kù)分別上樣到CHO-OPR8層析柱,洗滌層析柱后采用洗脫液洗脫與CHO-OPR8特異結(jié)合的樣品,將收集的洗脫液上樣到CHO-P層析柱,收集穿過峰,得到第一輪篩選出的候選多肽; 3)將第一輪篩選出的候選多肽再上樣到CHO-OPR8層析柱,將收集的洗脫液上樣到CHO-P層析柱,收集穿過峰,得到第二輪篩選出的候選多肽; 4)將第二輪篩選出的候選多肽再上樣到CHO-OPR8層析柱,將收集的洗脫液上樣到CHO-P層析柱,收集穿過峰,得到第三輪篩選出的候選多肽; 5)將最后一輪篩選的噬菌體全部轉(zhuǎn)染K91Kan,挑選陽(yáng)性菌株進(jìn)行接種培養(yǎng),提取質(zhì)粒,進(jìn)行序列分析; 6)將復(fù)制型噬菌體質(zhì)粒的序列分析結(jié)果與空載體的序列進(jìn)行比較,尋找插入片段的核苷酸序列,推導(dǎo)出氨基酸序列,并將序列進(jìn)行一級(jí)結(jié)構(gòu)的比較和二級(jí)結(jié)構(gòu)的分析,得到目的多肽。
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摘要
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本發(fā)明公開了一個(gè)低成癮性鎮(zhèn)痛藥物高通量篩選平臺(tái)。低成癮性鎮(zhèn)痛藥物的高通量篩選方法包括以下步驟:1)將細(xì)胞株CHO-OPR8及CHO-PCGMCC分別裝入層析柱中,得到CHO-OPR8層析柱及CHO-P層析柱;2)將待選擇的5肽庫(kù)和15肽庫(kù)分別上樣到CHO-OPR8層析柱,將收集的洗脫液上樣到CHO-P層析柱,收集穿過峰,得到第一輪篩選出的候選多肽;3)第二輪洗滌;4)第三輪洗滌;5)將最后一輪篩選的噬菌體全部轉(zhuǎn)染K91Kan,挑選陽(yáng)性菌株進(jìn)行接種培養(yǎng),提取質(zhì)粒,進(jìn)行序列分析;6)將復(fù)制型噬菌體質(zhì)粒的序列分析結(jié)果與空載體進(jìn)行比較,尋找插入片段的核苷酸序列,推導(dǎo)出氨基酸序列,得到目的多肽。
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國(guó)際公布
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