| 公開(公告)號(hào) | CN1250718C |
| 公開(公告)日 | 2006.04.12 |
| 申請(專利)號(hào) | CN02153855.7 |
| 申請日期 | 2002.12.05 |
| 專利名稱 | 蝰蛇蛇毒血凝酶的層析純化方法 |
| 主分類號(hào) | C12N9/74(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N9/74(2006.01)I;A61K38/48(2006.01)I;A61P7/04(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 兆科藥業(yè)（合肥)有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 許貞玉;錢 芳;夏紅梅;李兆羿 |
| 地址 | 230088安徽省合肥市長江西路669號(hào)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū) |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 |
| 代理人 | 王學(xué)強(qiáng) |
| 國省代碼 | 安徽;34 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種注射用蛇毒血凝酶的層析純化方法，其步驟包括： (1)將蝰蛇蛇毒用緩沖液溶解，離心去除沉淀； (2)將(1)中所得上清液用苯甲脒進(jìn)行親和層析，再用pH7.0～9.0的tris-HCl緩沖液和NaCl溶液線性梯度洗脫，得到類凝血酶的粗溶液； (3)將(1)中所得上清液用肝素進(jìn)行親和層析，再用pH7.0～9.0的tris-HCl緩沖液和NaCl溶液線性梯度洗脫，得到類凝血激酶的粗溶液； (4)濃縮類凝血酶和類凝血激酶的粗溶液，將所得類凝血酶和類凝血激酶的粗溶液分別經(jīng)過陰離子交換柱層析，用pH7.0～9.0的tris-HCl緩沖液和NaCl溶液線性梯度洗脫，純化得到類凝血酶和類凝血激酶的純?nèi)芤海? (5)濃縮類凝血酶和類凝血激酶的純?nèi)芤�，將所得類凝血酶和類凝血激酶的純�(nèi)芤悍謩e經(jīng)過凝膠過濾柱層析，用pH7.0～9.0的tris-HCl緩沖液洗脫，得到類凝血酶和類凝血激酶的精純?nèi)芤海? (6)將所得類凝血酶和類凝血激酶的精純?nèi)芤喊匆欢ū壤旌虾蟮玫交旌弦�，每毫升含�?個(gè)克氏單位的血凝酶活性，再加入適量的賦形劑、穩(wěn)定劑進(jìn)行過濾、灌裝、冷凍干燥、軋蓋，即獲得注射用蛇毒血凝酶成品。 |
| 摘要 | 注射用蛇毒血凝酶的純化工藝包括：蛇毒的溶解，親和層析分離得到類凝血酶和類凝血激酶的粗溶液，超濾濃縮，離子交換層析純化得到類凝血酶和類凝血激酶的純?nèi)芤海瑸V濃縮，凝膠層析獲得類凝血酶和類凝血激酶的精純?nèi)芤�，最后將上述類凝血酶和類凝血激酶的精純�(nèi)芤喊匆欢ū壤旌虾螅尤脒m量的賦形劑、穩(wěn)定劑，經(jīng)過濾、灌裝、冷凍干燥、軋蓋，最終獲得注射用蛇毒血凝酶成品等工藝。本工藝采用專一性吸附劑，可以一次性地快速完成大量酶溶液的粗提制備工作，并能最大程度地收集到粗品中的有效成份，且生物活性高。所得注射用蛇毒血凝酶經(jīng)動(dòng)物藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，全血凝血時(shí)間明顯縮短，肝臟切口的失血量明顯減少，多種毒素測定結(jié)果均為陰性。 |
| 國際公布 |
