方法名稱： |
四維靈芝液—核苷類成分的測定—高效毛細(xì)管電泳法 |
應(yīng)用范圍： |
本方法采用高效毛細(xì)管電泳法測定四維靈芝液中的核苷類成分腺苷及鳥苷的含量。 本方法適用于四維靈芝液。 |
方法原理： |
取供試品，離心取上清液，加于于處理好的大孔吸附樹脂上，依次以水、30%乙醇洗脫，收集30%乙醇部分，水浴上蒸干，殘?jiān)运芙舛ㄈ�，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，濾液作為供試品溶液，注入高效毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行電泳分離，用紫外檢測器檢測腺苷及鳥苷的相應(yīng)值，計(jì)算其含量。 |
試劑： |
1.乙醇 2 .硼砂 3. 十二烷基磺酸鈉（SDS) |
儀器設(shè)備： |
1 儀器 1.1 高效毛細(xì)管電泳儀 1.2 熔融石英毛細(xì)管柱（75μm×57cm，有效柱長50cm) 1.3紫外檢測器 2 分離條件 2.1 運(yùn)行緩沖液：20nmol/L硼砂（含30mmol/LSDS，pH 10.0) 95%乙醇 = 95 5 2.2 氣動(dòng)進(jìn)樣：20psi, 15s 2.3 柱溫：20℃ 2.4 檢測波長：254nm |
試樣制備： |
1.稱取供試品 精密量取四維靈芝液20mL。 2. 對照品儲備溶液的制備 精密稱取腺苷及鳥苷適量，用水為溶劑配制成濃度為0.1mg/L的對照品儲備溶液。 3. 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 精密稱取內(nèi)標(biāo)磺胺甲惡唑適量，用水為溶劑配制成濃度為0.2mg/L的內(nèi)標(biāo)溶液 4. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 精密吸取對照品儲備溶液各0.1、0.3、0.5、0.7、1.0、2.0mL，置于5mL量瓶中，各加入內(nèi)標(biāo)1mL，加水至刻度，搖勻，得系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。 5.供試品溶液的制備 取供試品，離心取上清液，加于于處理好的大孔吸附樹脂小柱（1.5×11cm)上，依次以水50mL、30%乙醇100mL洗脫，收集30%乙醇部分，水浴上蒸干，殘?jiān)运芙舛哭D(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加內(nèi)標(biāo)液1mL，加水至刻度，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，濾液作為供試品溶液， 注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一�！熬芰咳 毕抵噶咳◇w積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。 |
操作步驟： |
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 上述系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液分別注入高效毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行電泳分離，以紫外檢測器檢測，檢測波長為254nm，將腺苷及鳥苷的濃度對其峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程。 2. 供試品的測定 上述供試品溶液注入高效毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行電泳分離，以紫外檢測器檢測，檢測波長為254nm，記錄腺苷及鳥苷的相應(yīng)值，計(jì)算其含量。 |
參考文獻(xiàn)： |
戴敬，魯靜，林瑞超等.高效毛細(xì)管電泳法測定四維靈芝液中核苷類成分的含量. 中國中藥雜志，2002，27（9)：665-668. |
