醫(yī)學論文范文:麥冬治療妊娠期糖尿病胰島素抵抗的作用及機制

1.2.5標本測定

① 大鼠禁食8～10 h后，從后眼眶靜脈叢取血，血糖用葡萄糖氧化酶法測定，胰島素(Ins)以放射免疫法檢測. ②動物空腹采血后恢復2～3 d再行葡萄糖�惨葝u素耐量實驗（G�睮nsTT)測定大鼠胰島素敏感性. 大鼠于非空腹狀態(tài)下，腹腔注射20 g/L戊巴比妥鈉麻醉，行頸外靜脈和股動脈插管，先從靜脈注射葡萄糖（700 mg/kg)，以0.175 U/kg注射普通胰島素，從股動脈抽血用葡萄糖氧化酶法，測定實驗前及注射胰島素完畢后第3, 6, 9, 12, 15 min的血糖值. 胰島素敏感性用K值表示，具體方法為：以時間為橫坐標，血糖值經(jīng)自然對數(shù)轉(zhuǎn)化后為縱坐標，直線回歸所得到的回歸系數(shù)乘以100即為K值. K值減小表示機體對胰島素不敏感，即有IR. ③取腹腔凍存的脂肪組織（0.9 g)，用TRIzol一步法提取總RNA. 應用RT�睵CR法檢測脂肪組織中腫瘤壞死因子α(TNF�拨�)與瘦素(leptin) mRNA表達水平. 引物序列為：TNF�拨劣辛x鏈5′�睞GGCGCTCCCCAAAAAGATG��3′，無義鏈5′�睺GGCGGAGAGGAGGCTGACT��3′，擴增產(chǎn)物480 bp；Leptin有義鏈5′�睞CCCCAGCGAGGAAAATGTG��3′，無義鏈5′�睪GAAGGCAAGCTGGTGAGGA��3′，擴增產(chǎn)物288 bp；內(nèi)參照GAPDH有義鏈5′�睺TCATTGACCTCAACTACATG��3′，無義鏈5′�睪TGGCAGTGATGGCATGGAC��3′，擴增產(chǎn)物443 bp. PCR反應體系為25 μL，其中包括10×PCR緩沖液2.5 μL, 25 mmol/L MgCl2 1.5 μL, 10 mmol/L dNTPs 0.5 μL, 引物 2 μL, Taq酶2.5 μL, cDNA 2 μL. 循環(huán)參數(shù)：94℃預變性×1 min，58℃退火×1.5 min，72℃ 2 min，循環(huán)35次，最后7次延長至10 min，4℃保存. 取產(chǎn)物10 μL用20 g/L瓊脂糖凝膠電泳，60 V電泳1 h，透射紫外燈下觀察結(jié)果并拍照. 通過電泳圖像分析儀進行灰度測量，基因表達水平用TNF�拨梁蚻eptin與GAPDH灰度比值表示.

統(tǒng)計學處理： 計量數(shù)據(jù)用x±s表示，組間比較采用方差分析，應用SPSS11.5軟件統(tǒng)計數(shù)據(jù).

2結(jié)果

2.1血糖的改變GDM大鼠組空腹及餐后血糖較正常對照組升高（P<0.05)；與GDM大鼠比較，麥冬治療組和羅格列酮治療組空腹及餐后血糖均下降（P<0.05)，羅格列酮+麥冬治療組空腹及餐后血糖均下降（P<0.01)；與麥冬治療組比較，羅格列酮治療組空腹及餐后血糖無明顯變化（P>0.05)，羅格列酮+麥冬治療組空腹及餐后血糖下降（P<0.01)；與羅格列酮比較，羅格列酮+麥冬治療組空腹及餐后血糖下降（P<0.01,表1).表1各組大鼠血糖的改變（略)

2.2胰島素的改變GDM鼠組空腹胰島素水平較正常對照組升高（P<0.05)；與GDM大鼠比較，麥冬治療組和羅格列酮治療組空腹胰島素水平均下降（P<0.01)，羅格列酮+麥冬治療組胰島素水平下降更明顯（P<0.01)；與麥冬治療組比較，羅格列酮治療組空腹胰島素水平無明顯變化（P>0.05)，羅格列酮+麥冬治療組空腹胰島素水平下降（P<0.01)；與羅格列酮比較，羅格列酮+麥冬治療組空腹胰島素水平下降（P<0.01,表2).表2各組大鼠血胰島素水平的改變（略)

2.3腹腔內(nèi)脂肪組織中TNF�拨恋母淖兣c對照組比較，GDM組TNF�拨恋谋磉_水平顯著升高（P<0.01)；與GDM組比較，麥冬治療組TNF�拨恋谋磉_水平降低（P<0.05)，格列酮治療組與羅格列酮+麥冬治療組TNF�拨恋谋磉_水平顯著降低(P<0.01)；與麥冬治療組比較，格列酮治療組和羅格列酮+麥冬治療組TNF�拨恋谋磉_水平顯著降低(P<0.01,圖1).

2.4腹腔內(nèi)脂肪組織中l(wèi)eptin的改變與對照組比較，GDM組leptin的表達水平顯著升高（P<0.01)；與GDM組比較，麥冬治療組leptin的表達水平降低（P<0.05)，格列酮治療組與羅格列酮+麥冬治療組leptin的表達水平顯著降低(P<0.01)；與麥冬治療組比較，羅格列酮治療組和羅格列酮+麥冬治療組leptin的表達水平顯著降低(P<0.01,圖2).

3討論

GDM指妊娠期發(fā)生或發(fā)現(xiàn)的不同程度葡萄糖耐量異常,若發(fā)生在妊娠早期不排除葡萄糖耐量異常在妊娠前就已經(jīng)存在［5-6］. GDM病因不明. 經(jīng)典的觀點認為孕期胎盤生乳素、催乳素、糖皮質(zhì)激素、孕激素等拮抗胰島素激素水平升高，造成胰島素抵抗狀態(tài)是主要原因. 近年研究發(fā)現(xiàn)GDM的發(fā)生除與胰島素分泌及功能異常有關外,可能還與一些炎癥因子、脂肪因子參與.

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