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分別取pRNATSurvivin組、陰性對(duì)照組、空白對(duì)照組的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔加入細(xì)胞1×104個(gè)，24 h后加入含抗癌藥物的完全培養(yǎng)基,分別加入5FU(美國Sigma公司，1、4、8 μg/mL)或優(yōu)福定(廣州市振康醫(yī)藥有限公司，1、4、8 μg/mL) ,每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔,繼續(xù)作用24 h,每孔加入20 μL MTT(5 mg/mL)繼續(xù)培養(yǎng)4 h,棄去培養(yǎng)液,加入DMSO 150 μL,酶標(biāo)儀測(cè)定570 nm處吸光度(A)值。根據(jù)3孔平均A值計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率(%) = (1-A實(shí)驗(yàn)組/A對(duì)照組)×100%醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站f1411.cn。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
使用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間比較采用方差分析，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié)果
2.1 Survivin siRNA轉(zhuǎn)染HEP2細(xì)胞后對(duì)Survivin mRNA表達(dá)的影響
pRNATSurvivin組309 bp處的條帶亮度顯著低于其余各組(圖1)，pRNATSurvivin組在24、48、72 h mRNA表達(dá)抑制率分別為67.15%、75.13%和75.43%，與空白對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.01)，且其抑制作用隨處理時(shí)間延長(zhǎng)而呈增長(zhǎng)趨勢(shì)。
2.2 Survivin siRNA轉(zhuǎn)染HEP2細(xì)胞后對(duì)Survivin蛋白表達(dá)的影響
pRNATSurvivin組轉(zhuǎn)染24、48、72 h后Survivin表達(dá)抑制率分別為63.15%、77.76%、79.27%，與空白對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，圖2)。
2.3 Survivin siRNA對(duì)HEP2細(xì)胞藥物敏感性的影響
pRNATSurvivin轉(zhuǎn)染HEP2細(xì)胞后不同濃度的5FU和優(yōu)福定的生長(zhǎng)抑制率明顯高于空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組(P<0.01)，而空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組的生長(zhǎng)抑制率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表1)。表1 MTT法檢測(cè)Survivin siRNA對(duì)HEP2喉癌細(xì)胞藥物敏感性的影響
3 討論
化療在喉癌的綜合治療中占有重要地位,多藥耐藥是影響治療效果的主要原因之一[3-4]。如何克服腫瘤化療耐藥性是值得深入研究的課題。研究表明,化學(xué)藥物所致細(xì)胞毒作用的終末效應(yīng)均為誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[5],抗腫瘤藥物的療效主要取決于其激活細(xì)胞凋亡的能力[6],由于腫瘤細(xì)胞常存在凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑缺陷,導(dǎo)致許多腫瘤對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐受[5]。因此,通過活化凋亡信號(hào)關(guān)鍵分子而促進(jìn)細(xì)胞凋亡,為提高腫瘤化療敏感性提供了新思路。
Survivin是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)家族中一類抑制凋亡，調(diào)節(jié)細(xì)胞分化調(diào)節(jié)因子[2]。目前已有研究發(fā)現(xiàn)在胃腺、乳腺等高度惡性轉(zhuǎn)移性腫瘤中Survivin過度表達(dá)[7],在一些喉癌細(xì)胞系中也有證據(jù)證明Survivin呈高度表達(dá)[8]。因此抑制Survivin在惡性腫瘤中的高度表達(dá)成為增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性及凋亡能力的關(guān)鍵所在醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站f1411.cn。
