藥物分析-授課教案:第二章藥物的鑒別試驗

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時間分配)

一、 概 述

依據(jù)藥典進(jìn)行的藥物分析主要有三大項：鑒別、檢查和含量測定。

藥物的鑒別試驗（identification test)是用于鑒別藥物的真?zhèn)�，在藥物分析中屬首項工作，只有證實被分析的藥物是真的，才有必要接著進(jìn)行檢查、含量測定。

 藥典所收載的藥物項下的鑒別試驗方法，僅適用于貯藏在有標(biāo)簽容器中的藥物，用以證實是否為其所標(biāo)示的藥物。它與分析化學(xué)中的定性鑒別有所區(qū)別。這些試驗方法不能賴以鑒別未知物。

原料藥：鑒別試驗結(jié)合性狀項下的外觀和物理常數(shù)進(jìn)行確證。

二、鑒別的項目

（一)性狀 藥物的性狀反映了藥物特有的物理性質(zhì)，一般包括外觀、嗅、味、溶解度以及物理常數(shù)等。

（二)一般鑒別試驗（general identification test)

 *以藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)及其物理化學(xué)性質(zhì)為依據(jù)，通過化學(xué)反應(yīng)來鑒別藥物真?zhèn)蔚摹?/p>

 *無機(jī)藥物：根據(jù)其組成的陰離子和陽離子的特殊反應(yīng)，并以藥典附錄III項下的一般鑒別試驗為依據(jù)。 *有機(jī)藥物：采用典型的官

能團(tuán)反應(yīng)。

*一般鑒別試驗的項目： 丙二酰脲類、托烷生物堿類、芳香第一胺類、有機(jī)氟化物類、無機(jī)金屬鹽類（鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、鈣鹽、鋇鹽、銨鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋁鹽、鋅鹽、銅鹽、銀鹽、汞鹽、鉍鹽、銻鹽、亞錫鹽)、有機(jī)酸鹽（水楊酸鹽、枸櫞酸鹽、乳酸鹽、苯甲酸鹽、酒石酸鹽)、無機(jī)酸鹽（亞硫酸鹽或亞硫酸氫鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、硼酸鹽、碳酸鹽與碳酸氫鹽、醋酸鹽、磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物)。

*一般鑒別試驗僅供確認(rèn)單一的化學(xué)藥物，如為數(shù)種化學(xué)藥物的混合物或有干擾物質(zhì)存在時，除另有規(guī)定外，應(yīng)不適用。

*通過一般鑒別試驗只能證實是某一類藥物，而不能證實是哪一種藥物。

1.有機(jī)氟化物

(1)．鑒別試驗 取供試品約7mg，照氧瓶燃燒法（附錄VII　C)進(jìn)行有機(jī)破壞，用水20ml與0.01mol/L氫氧化鈉溶液6.5ml為吸收液，俟燃燒完全后，充分振搖；取吸收液2ml，加茜素氟藍(lán)試液0.5ml，再加12%醋酸鈉的稀醋酸溶液0.2ml，用水稀釋至4ml，加硝酸亞鈰試液0.5ml，即顯藍(lán)紫色；同時做空白對照試驗。

(2)．試驗原理 有機(jī)氟化物經(jīng)氧瓶燃燒法破壞，為堿性溶液吸收成為無機(jī)氟化物后，與茜素氟藍(lán)、硝酸亞鈰形成藍(lán)紫色絡(luò)合物。 　

復(fù)習(xí)舊課（3min)

引入新課（2min)

5min

20min

50mi

例如，經(jīng)一般鑒別反應(yīng)的鈉鹽試驗，證實某一藥物為鈉鹽，但不能辨認(rèn)是氯化鈉、苯甲酸鈉或者是其它某一種鈉鹽藥物。要想最后證實被鑒別的物質(zhì)到底是哪一種藥物，必須在一般鑒別試驗的基礎(chǔ)上，再進(jìn)行專屬鑒別試驗，方可確認(rèn)。

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時間分配)

2.有機(jī)酸鹽

(1).水楊酸鹽

鑒別試驗一  取供試品的稀溶液，加三氯化鐵試液1滴，即顯紫色。

原理 本品在中性或弱酸性條件下，和三氯化鐵試液生成配位化合物，在中性時呈紅色，弱酸性時呈紫色；若在強(qiáng)酸性中，配位化合物分解生成游離水楊酸。 　　

本反應(yīng)極為靈敏，只需取稀溶液進(jìn)行試驗，如取用量大，產(chǎn)生顏色過深時，可加水稀釋后觀察。 　　

鑒別試驗二   取供試品溶液，加稀鹽酸，即析出白色水楊酸沉淀；分離，沉淀在醋酸銨試液中溶解。

原理  水楊酸不溶于水（0℃時溶解度為1g/1500L)，故供試液加酸即析出游離水楊酸。由于水楊酸的酸性（K＝1.06×10^-3，25℃)大于醋酸（K＝1.85×10^-5，25℃)，故能與醋酸銨作用釋出醋酸，而本身形成銨鹽溶解。析出的水楊酸亦可經(jīng)冷水洗滌、干燥后測定熔點（158℃-161℃)。

(2)．苯甲酸鹽 3．乳酸鹽 4．枸櫞酸鹽 5．酒石酸鹽 6．醋酸鹽

鑒別試驗 取供試品，加硫酸和乙醇后加熱，即產(chǎn)生乙酸乙酯的香氣。

3.無機(jī)金屬鹽

(1)．鈉鹽

鑒別試驗  取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，火焰即顯鮮黃色。

原理 鈉的火焰光譜在可見光區(qū)，有589.0nm、589.6nm主要譜線，故其燃燒火焰顯黃色。

本焰色反應(yīng)極為靈敏（最低檢出限量為0.1ng鈉離子)。因此，對所用儀器和試劑要求必須很嚴(yán)格。在檢測前應(yīng)將鉑絲燒紅，趁熱浸入鹽酸中，如此反復(fù)數(shù)次，直至火焰不染黃色后，再蘸取供試品進(jìn)行測定。只有當(dāng)強(qiáng)烈的黃色火焰持續(xù)數(shù)秒鐘不退，才能確認(rèn)為鈉鹽。

(2)．鉀鹽 　　

鑒別試液   焰色反應(yīng)顯紫色，但有少量鈉鹽混存時，須隔色玻璃透視，方能辨認(rèn)。

原理 鉀的火焰光譜在可見光區(qū)有766.49nm、769.90nm與404.4nm幾條譜線，其中以766.49nm與769.90nm兩條譜線最強(qiáng)。由于人眼在此波長附近敏感度較差，故鉀鹽的燃燒火焰顯紫色。如有鈉鹽混存，因鈉焰靈敏度很高，需透過藍(lán)色鈷玻璃將鈉焰黃色濾去，此時火焰顯粉紅色。

(3)．鈣鹽

鑒別試驗一 焰色反應(yīng)顯磚紅色（622nm)。、

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時間分配)

 (4)．銨鹽

鑒別試驗  取供試品，加過量氫氧化鈉試液后，加熱，即分解，發(fā)生氨臭；遇濕潤的紅色石蕊試紙，能使之變藍(lán)，并能使硝酸亞汞試液濕潤的濾紙顯黑色。

原理  其反應(yīng)式為：　

4.無機(jī)酸根

（1)氯化物

鑒別一　

　如供試品為生物堿或其他有機(jī)堿的鹽酸鹽，須先加氨試液使成堿性，將析出的沉淀濾過除去，取濾液進(jìn)行試驗。

鑒別二

能使?jié)駶櫟牡饣��?a class="channel_keylink" href="http://f1411.cn/mingzu/2009/20090512114713_152891.shtml" target="_blank">淀粉試紙顯藍(lán)色。

（2)硫酸鹽

　鑒別一　取供試品溶液，加氯化鋇試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在鹽酸或硝酸中均不溶解。

　鑒別二　取供試品溶液，加醋酸鉛試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在醋酸銨試液或氫氧化鈉試液中溶解。

（三)專屬鑒別試驗（specific identification test)

*根據(jù)每一種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異及其所引起的物理化學(xué)特性的不同，選用某些特有的靈敏定性反應(yīng)，來鑒別藥物真?zhèn)蔚�。是證實某一種藥物的依據(jù)。

綜上所述，一般鑒別試驗是以某些類別藥物的共同化學(xué)結(jié)構(gòu)為依據(jù)，根據(jù)其相同的物理化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行藥物真?zhèn)蔚蔫b別，以區(qū)別不同類別www.med126.com的藥物。而專屬鑒別試驗，則是在一般鑒別試驗的基礎(chǔ)上，利用各種藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)差異，來鑒別藥物，以區(qū)別同類藥物或具有相同化學(xué)結(jié)構(gòu)部分的各個藥物單體，達(dá)到最終確證藥物真?zhèn)蔚哪康摹?/p>

20min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時間分配)

三、鑒別方法

（一)化學(xué)鑒別法

1．干法　將供試品加適當(dāng)試劑在規(guī)定的溫度條件下（一般是高溫)進(jìn)行試驗，觀測此時所發(fā)生的特異現(xiàn)象。

(1)焰色試驗:常用干法，利用某些元素所具有的特異焰色，可鑒別它們?yōu)槟囊活慃}類藥物。

方法為：取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，使火焰顯出特殊的顏色。

(2)加熱分解:在適當(dāng)?shù)臏囟葪l件下，加熱使供試品分解，生成有特殊氣味的氣體。

2．濕法 系指將供試品和試劑在適當(dāng)?shù)娜軇┲�，于一定條件下進(jìn)行反應(yīng)，發(fā)生易于觀測的化學(xué)變化，如顏色、沉淀、氣體、熒光等。

(1)呈色反應(yīng)鑒別法：系指供試品溶液中加入適當(dāng)?shù)脑噭┤芤�，在一定條件下進(jìn)行反應(yīng)，生成易于觀測的有色產(chǎn)物。在鑒別試驗中最為常用的反應(yīng)類型有： 1)三氯化鐵呈色反應(yīng)---酚羥基或水解后產(chǎn)生酚羥基； 2)異羥肟酸鐵反應(yīng)---多為芳酸及其酯類、酰胺類； 3)茚三酮呈色反應(yīng)---脂肪氨基； 4)重氮化-偶合顯色反應(yīng)---芳伯氨基或能產(chǎn)生芳伯www.med126.com氨基； 5)氧化還原顯色反應(yīng)及其它顏色反應(yīng)。

 （2)沉淀生成反應(yīng)鑒別法：常用的這類反應(yīng)有：１)與重金屬離子的沉淀反應(yīng)　在一定條件下，藥物和重金屬離子反應(yīng)，生成不同形式的沉淀； 2)與硫氰化鉻銨（雷氏鹽)的沉淀反應(yīng)　多為生物堿及其鹽，具有芳香環(huán)的有機(jī)堿及其鹽； 3)其它沉淀反應(yīng)。

（3)熒光反應(yīng)鑒別法：常用的熒光發(fā)射形式有以下類型： 1)藥物本身可在可見光下發(fā)射熒光； 2)藥物溶液加硫酸使呈酸性后，在可見光下發(fā)射熒光； 3)藥物和溴反應(yīng)后，于可見光下發(fā)射出熒光； 4)藥物和間苯二酚反應(yīng)后，發(fā)射出熒光及藥物經(jīng)其它反應(yīng)后，發(fā)射熒光。

(4)氣體生成反應(yīng)鑒別法： 1)大多數(shù)的胺（銨)類藥物、酰脲類藥物以及某些酰胺類藥物，可經(jīng)強(qiáng)堿處理后，加熱，產(chǎn)生氨（胺)氣； 2)化學(xué)結(jié)構(gòu)中含硫的藥物，可經(jīng)強(qiáng)酸處理后，加熱，發(fā)生硫化氫氣體； 3)含碘有機(jī)藥物經(jīng)直火加熱，可生成紫色碘蒸氣；含醋酸酯和乙酰胺類藥物，經(jīng)硫酸水解后，加乙醇可產(chǎn)生乙酸乙酯的香味。

（二)光譜鑒別法

1．紫外光譜鑒別法 常用的方法有： 1)標(biāo)準(zhǔn)品對照法； 2)規(guī)定吸收波長法； 3)規(guī)定吸收波長和相應(yīng)的吸收度法； 4)規(guī)定吸收波長和吸收系數(shù)法； 5)規(guī)定吸收波長和吸收度比值法。

 2．紅外光譜鑒別法 紅外光譜法是一種專屬性很強(qiáng)、應(yīng)用較廣（固體、液體、氣體樣品)的鑒別方法。

1. 標(biāo)準(zhǔn)圖譜對照法：中國藥典（2005年版)和BP
2. 對照品法：USP。

10min

30min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時間分配)

（三) X射線粉末衍射法

X射線(倫琴射線)

  波長為0.01～1(3)nm

   當(dāng)X射線投身到晶體上時，各原子對入射X射線發(fā)生相干散射，干涉的結(jié)果可以使散射的X射線的強(qiáng)度增強(qiáng)或減弱發(fā)生相長干涉產(chǎn)生的X射線稱為X射線的衍射線。

—布拉格公式

20min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時間分配)

  （四)色譜鑒別法 利用不同物質(zhì)在不同色譜條件下，產(chǎn)生各自的特征色譜行為（Rf值或保留時間)進(jìn)行鑒別試驗。常用的方法有：

1.薄層色譜鑒別法 在實際工作中，一般采用對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品)比較法，要求供試品斑點的Rf值應(yīng)與對照品斑點一致。

2.高效液相色譜鑒別法 一般規(guī)定按供試品含量測定項下的高效液相色譜條件進(jìn)行試驗。要求供試品和對照品色譜峰的保留時間應(yīng)一致。含量測定方法為內(nèi)標(biāo)法時，可要求供試品溶液和對照品溶液色譜圖中藥物峰保留時間與內(nèi)標(biāo)物峰的保留時間比值應(yīng)相同。

3.氣相色譜鑒別法 方法同高效液相色譜法。

4.紙色譜鑒別法 紙色譜法存在分離效能低、分析時間長等缺點，在藥物鑒別試驗中逐漸被薄層色譜法所取代。

15min

基本內(nèi)容

注解（進(jìn)展、輔助

手段和時間分配)

   四、鑒別試驗條件

（一)供試液濃度

（二)反應(yīng)溫度

（三)供試液pH值

（四)反應(yīng)時間

（五)防止干擾

15min

問題討論(5min)；

作業(yè)和習(xí)題布置2(min)；

歸納總結(jié)(3min)

小 結(jié)

1.從鑒別的意義、判斷藥物真?zhèn)危�引出藥物鑒別的重要性

2.講清藥典規(guī)定藥物鑒別的項目，鑒別試驗的條件及靈敏度的意義

復(fù)習(xí)思考題

或

作 業(yè) 題

1.簡述鑒別試驗的定義。

2.影響鑒別試驗的因素有哪些？

3.常用的鑒別方法有哪些？

4.一般鑒別試驗和專屬鑒別試驗。

教 學(xué) 效 果

與 分 析

1.結(jié)合已學(xué)分析化學(xué)知識，啟發(fā)學(xué)生總結(jié)出藥物的一般鑒別方法。

2.運用無機(jī)化學(xué)、有機(jī)化學(xué)知識，講解各類有機(jī)物、無機(jī)物的鑒別

試驗及原理。效果較好。