自1983年Warren和Mashall首次從胃粘膜標(biāo)本中分離培養(yǎng)出幽門彎曲菌(CampylobacterPylori),并提出它可能與慢性胃炎(CG)和潰瘍。≒U)病密切相關(guān)后,引起了全球關(guān)注,也為CGG、GU的病因?qū)W研究開創(chuàng)了一條新途征。1990年9月國際微生物聯(lián)合會(huì)鑒定為“幽門螺桿菌”(Helicobacter Pylori, Hp)。我國是慢性胃病多發(fā)國家,自1985年張振華首次報(bào)告從胃粘膜中檢出此菌后,已有不少單位對此進(jìn)行研究,我院自1988年5月以來開展了此項(xiàng)研究,對325例因上消化道癥狀行內(nèi)鏡檢查者進(jìn)行研究,旨在從臨床分析探討Hp與慢性胃炎、消化潰瘍和胃癌的關(guān)系。
1 對象和方法
1.1 對象
具有上消化道癥狀的325例,男248例,女77例;年齡17歲~75歲,平均年齡43.9歲。根據(jù)內(nèi)鏡及組織學(xué)診斷,慢性淺表性胃炎(CSG)72例,慢性萎縮性胃炎(CAG)34例,胃潰瘍(GU)54例,球部潰瘍(DU)108例,胃癌(GC)13例,正常(N)14例。按胃粘膜中是否有中性粒細(xì)胞浸潤將胃炎分活動(dòng)性和非活動(dòng)性胃炎。
1.2 方法
用OlymPus GIF XQ10內(nèi)鏡進(jìn)行檢查,CG,DU,N組取距幽門5cm內(nèi)的胃竇粘膜,GU取潰瘍邊緣粘膜,GC取癌組織,各取4~5塊,分別作細(xì)菌培養(yǎng)、直接涂片、組織切片、HE染色及改良Warthin-Starry染色,部分作掃描電鏡觀察。將活檢標(biāo)本接種于肉浸液加8%~10%羊血瓊脂平板中,于改良厭氧灌(5%O2,7%CO2,80%N2,8%H2,濕度98%)內(nèi),37°C,培養(yǎng)3d~5d,見1mm~2mm大小的露滴樣、光滑、灰白色、輕度溶血的菌落,菌落涂片鏡檢,生化鑒定(尿素酶、氧化酶、觸酶、馬尿酸分解試驗(yàn)等)。7d不見菌落者陰性。Hp陽性標(biāo)準(zhǔn):培養(yǎng)陽性或尿素酶陽性加直接涂片、改良W-S染色陽性中任一項(xiàng)陽性者;顧z標(biāo)本用10%福樂馬林固定、切片厚5μm,常規(guī)HE染色,作組織病理學(xué)診斷。改良W-S染色,在10×100倍光鏡下尋找Hp。供掃描電鏡(SEM)觀察的標(biāo)本先用生理鹽水輕輕沖洗粘膜面,用2.5%戊二醛固定及1%鋨酸固定后,經(jīng)脫水,臨界點(diǎn)干燥、噴金后,在日立S—570型電鏡下觀察。所有資料按四格表行X2檢驗(yàn),若例數(shù)小于40或理論值小于1,則采用確切概率法計(jì)算。
2 結(jié)果
2.1 各種胃病Hp的檢出率
胃粘膜標(biāo)本分別用4種方法檢測,Hp的檢出率分別為尿素酶試驗(yàn)69.9%,直接涂片52%,改良W-S75.1%,培養(yǎng)63.1%;以改良W-S法檢出率最高,直接涂片法檢出率最低;其中直接涂片法與其它三種方法比較,差異有非常顯著性(P<0.05);培養(yǎng)法與改良W-S比較,差異有顯著性(表1,P<0.05)。
Hp的總檢出率為70.2%,CSG,CAG,GU,DU的Hp檢出率高于N組,差異有非常顯著性(P<0.01);(均P<0.01);DU檢出率高于CAG,CSG,GU組(均P<0.01);CSG,CAG,GU組間兩兩比較,Hp檢出率無顯著差異(表2,P<0.05)。
表1 胃十二指疾病Hp檢出率
項(xiàng)目 | CSG | CAG | GU* | DU* | GCa | N | 合計(jì) | 陽性率 |
例數(shù) | 102 | 34 | 54 | 108 | 13 | 14 | 325 | |
尿素酶試驗(yàn) | 72 | 24 | 34 | 94 | 3 | 0 | 227 | 89.9% |
直接涂片 | 65 | 17 | 26 | 80 | 1 | f1411.cn/hushi/0 | 169 | 52.0% |
改良W-S | 76 | 26 | 39 | 98 | 4 | 1 | 244 | 75.1% |
培養(yǎng) | 68 | 19 | 30 | 86 | 1 | 1 | 205 | 63.1% |
*表示均伴有慢性胃炎
表2 胃十二指腸疾患Hp檢出率
項(xiàng)目 | CSG | CAG | GU | DU | GCa | N | 合計(jì) |
例數(shù) | 102 | 34 | 54 | 108 | 13 | 14 | 325 |
陰性數(shù) | 72 | 24 | 34 | 94 | 3 | 1 | 228 |
陽性率(%) | 70.1 | 70.6 | 63.0 | 87.0 | 23.1 | 7.1 | 70.2 |
2.2 組織病理學(xué)檢查
改良W-S染色中Hp存在于胃粘膜表面上皮細(xì)胞粘液層間、胃小凹中,菌量多時(shí)可在f1411.cn/yaoshi/淺層腺體的腔中見到。在淺黃色背景上呈棕色或棕褐色彎曲狀、弧形菌。在慢性胃炎中,Hp的存在與炎癥的活動(dòng)性密切相關(guān)(表3,表4)。在CSG組57例活動(dòng)性胃炎,Hp陽性55例;45例非活動(dòng)性胃炎,17例Hp陽性;二者比較差異有非常顯著性(P<0.05);在CAG組,20例活動(dòng)性胃炎,19例為Hp陽性,14例非活動(dòng)性胃炎,5例Hp陽性,二者比較差異顯著性(P<0.05)。
表3 慢性淺表胃炎活動(dòng)性與Hp檢出率
活動(dòng)性 | 陽性 | 陰性 | 合計(jì) |
有 | 55 | 2 | 57 |
非 | 17 | 28 | 45 |
合計(jì) | 72 | 30 | 102 |
表4 慢性萎縮性胃炎活動(dòng)性與Hp檢出率
活動(dòng)性 | 陽性 | 陰性 | 合計(jì) |
有 | 19 | 1 | 20 |
非 | 5 | 9 | 14 |
合計(jì) | 24 | 10 | 34 |
2.3 SEM觀察
對4例慢性胃炎標(biāo)本進(jìn)行SEM觀察,這4例用上述4種方法均檢出Hp。電鏡下見Hp呈弧形或“S”形,少數(shù)量橢圓形或腎形。約0.5μm×2.5μm大小,菌體光滑,中央部分電子密度低,兩端鈍圓,有1~5根單極鞭性鞭毛。Hp緊貼胃粘膜上皮細(xì)胞。
3 討論
作者對幾種常用方法Hp檢出率進(jìn)行比較,以改良W-S檢出率最高,直接涂片法檢出率最低,且直接涂片與其它3種方法比較差異顯著。細(xì)菌培養(yǎng)是鑒定Hp陽性最可靠的方法,但培養(yǎng)需一定條件和技術(shù),影響因素多,陽性率較低,一般單位難以開展。直接涂片可見革蘭氏陰性彎曲菌,但受涂片技巧和鏡檢經(jīng)驗(yàn)限制,陽性率較低。改良W-S染色是一種檢出率高的經(jīng)典方法,但其操作復(fù)雜,耗時(shí)耗資。尿素酶試驗(yàn)具有快速、簡便、經(jīng)濟(jì)、敏感性、特異性較高等優(yōu)點(diǎn),易普及推廣,但仍有一定假陰性和假陽性。本組Hp總檢出率70.2%,以DU的陽性率最高80.7%,GCa和“正!苯M檢出率低,分別為23.1%、7.1%。GCa組和“正!苯M與CSG,CAG,GU,DU組比較,Hp檢出率差異有異常顯著意義GCa組與正常組比較,差異無顯著性;CGS,CAG,GU間兩兩比較差異無顯著性;而DU高于任何一組(P<0.01)。
我們的結(jié)果表明,胃粘膜中Hp存在與慢性胃炎和消化性潰瘍的發(fā)病有關(guān),這與前人報(bào)告結(jié)果一致。組織病理學(xué)發(fā)現(xiàn)活動(dòng)性胃炎中的Hp檢出率顯著高于非活動(dòng)性胃炎,雖也有報(bào)告未見此種關(guān)聯(lián)。Shousha等用透射電鏡觀察到,胃粘膜上皮間有中粒細(xì)胞浸潤,且與Hp混合在一起,一些中性粒細(xì)胞可吞噬Hp,提示Hp可能引起炎癥。我們用抗Hp藥物De-Nol治療71例慢性胃炎,Hp的清除率87.8%,且隨Hp的清除,組織學(xué)檢查胃炎明顯減輕。血清學(xué)檢查表明抗Hp抗體與慢性胃炎呈正相關(guān)。這些都提示Hp可能是慢性胃炎的病因。據(jù)報(bào)道用雷尼替丁治療伴Hp感染的球部潰瘍,4周后潰瘍愈合,但Hp仍存在。用雷尼替丁聯(lián)合抗生素或De-Nol治療潰瘍,難治性潰瘍可治愈,潰瘍復(fù)發(fā)率明顯降低。這提示Hp即使對潰瘍病無直接致病作用,亦可能與潰瘍病頑固不愈及其復(fù)發(fā)密切相關(guān),可能雖潰瘍發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素。
在胃癌組織Hp檢出率與正常組織比較差異無顯著性,提示此菌與胃癌可能無直接關(guān)系,其他作者也有類似報(bào)告。Hp作為慢性胃炎和潰瘍病的病因,其真正致病機(jī)理仍未完全闡明,只是間接證據(jù)證明Hp存在于大部分胃炎和潰瘍病中,經(jīng)抗Hp治療隨Hp清除,炎癥改善,潰瘍復(fù)發(fā)率降低。但還有部分胃炎、潰瘍中并未檢出Hp,其他抗?jié)兯幹委熀箅mHp仍存在,但潰瘍可以愈合。因此,還需要進(jìn)一步建立成功的動(dòng)物模型來促進(jìn)研究Hp在慢性胃炎和潰瘍病中的確切作用。