本品系精制白喉類毒素經(jīng)氫氧化鋁吸附制成。用于預(yù)防白喉。
1 毒素制造
1.1菌種
1.1.1 應(yīng)選用中國藥品生物制品檢定所分發(fā)或同意的白喉?xiàng)U菌PW8株，或經(jīng)由PW8株篩選的產(chǎn)毒高、免疫力強(qiáng)的菌種。必要時(shí)可對菌種進(jìn)行篩選。
1.1.2 菌種宜用凍干法保存。亦可用血清斜面或產(chǎn)毒培養(yǎng)基傳代保存，但代數(shù)不宜過多。
1.2 培養(yǎng)基
宜用胰酶牛肉消化液培養(yǎng)基或其他適宜培養(yǎng)基，但不得采用馬肉或其他馬體組織，應(yīng)盡量減少對人體引起過敏反應(yīng)的物質(zhì)，不應(yīng)含有可以引起人體毒性反應(yīng)的物質(zhì)。
1.3 毒素
1.3.1 毒素制造過程應(yīng)嚴(yán)格控制雜菌污染。凡經(jīng)鏡檢或純菌試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)污染者應(yīng)廢棄。
1.3.2 用于生產(chǎn)的毒素效價(jià)不得低于150Lf/ml。
1.3.3培養(yǎng)物加甲醛溶液或甲苯殺菌后進(jìn)行精制或過濾后進(jìn)行脫毒。所用化學(xué)原料應(yīng)符合《中國生物制品主要原材料試行標(biāo)準(zhǔn)》。
2 精制
2.1毒素或類毒素可采用硫酸銨活性炭二段鹽析法或其他適宜方法精制。
2.2用于精制的毒素或類毒素可多批混合，但不得超過5批。
2.3精制過程應(yīng)避免染菌，透析過程可加適量防腐劑，有肉眼可見染菌者應(yīng)廢棄。
2.4 化學(xué)原料等級應(yīng)不低于化學(xué)純。
2.5用同一菌種、培養(yǎng)基處方、精制方法制造的類毒素在同一容器內(nèi)混合均勻后除菌過濾者為1批。除菌不徹底者可重濾。
3 類毒素制造
3.1制造過程應(yīng)減少污染機(jī)會，如有肉眼可見染菌應(yīng)予廢棄。
3.2 毒素或精制毒素中加入適量的甲醛溶液，置適宜溫度進(jìn)行脫毒。精制毒素亦可加適量賴氨酸后再加甲醛脫毒。所用化學(xué)原科等級不應(yīng)低于化學(xué)純。
3.3 脫毒試驗(yàn)
每瓶類毒素或精制類毒素取樣，用滅菌生理鹽水分別稀釋至100Lf/ml，用體重2.0kg左右的家兔2只，每只動物分別皮內(nèi)注射上述稀釋樣品各0.1ml及25倍稀釋的錫克毒素0.1ml,于96小時(shí)判定結(jié)果。樣品注射部位須無反應(yīng)或僅有幾無可量的反應(yīng)，錫克反應(yīng)須為陽性。
3.4 脫毒不完全者可繼續(xù)脫毒，必要時(shí)可補(bǔ)加適量甲醛溶液。
3.5 用于生產(chǎn)的類毒素效價(jià)不應(yīng)低于100Lf/ml。
3.6 毒性逆轉(zhuǎn)試驗(yàn)
每瓶精制類毒素取樣，用pH7.0～7.4磷酸鹽緩沖鹽水分別稀釋至30～50Lf/ml，置37℃20～30天，用體重2.0kg左右的家兔2只，每只家兔分別皮內(nèi)注射上述稀釋樣品各0.1ml及25倍稀釋的錫克毒素0.1ml，于72小時(shí)判定結(jié)果。樣品注射部位紅腫反應(yīng)直徑不應(yīng)超過15mm，錫克反應(yīng)須為陽性。
3.7 精制類毒素應(yīng)加0.01%(g/ml)硫柳汞為防腐劑，毒素精制法制造的精制類毒素未除游離甲醛者可免加防腐劑。
3.8 類毒素保存于2～8℃，自脫毒合格之日起不得超過3年。
4 精制類毒素檢定和保存
4.1pH應(yīng)為6.4～7.4
4.2 無菌試驗(yàn)
按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行
4.3 純度
應(yīng)不低于1500Lf/mgPN。
4.4 安全試驗(yàn)
用生理鹽水將各亞批等量混合的精制類毒素稀釋成50Lf/ml，用體重300～400g豚鼠4只，每只腹側(cè)皮下注射5ml，觀察30天。前5日注意觀察注射局部，第10、20、30天稱取體重。觀察期間每只動物體重不得持續(xù)下降，到期每只動物體重應(yīng)比注射前增加，注射局部無壞死，無連片脫皮、脫毛。后期不得有麻痹癥狀。
4.5 效力試驗(yàn)
將各亞批等量混合的精制類毒素稀釋成35Lf/ml，用體重270～350g健康豚鼠5只，每只皮下注射0.5ml，第30天各攻擊10MLD白喉毒素。用于配制含有百日咳菌苗的制品，可按成品比例與百日咳菌苗配成小量二聯(lián)制劑樣品，免疫方法與劑量同上，第30天各皮下攻擊50MLD白喉毒素。二種攻毒均觀察7日，攻擊后動物死亡數(shù)不得超過20%。同時(shí)另用體重240～270g健康豚鼠3只，各皮下攻擊1MLD白喉毒素作對照，其中2只應(yīng)在96小時(shí)內(nèi)死亡，允許1只晚死或發(fā)病。
4.6 保存與效期
保存于2～8℃。自精制之日起效期為3年半。
5 吸附劑的配制
見《吸附精制破傷風(fēng)類毒素制造及檢定規(guī)程》中5項(xiàng)。
6 吸附精制類毒素的制造
6.1吸附制品應(yīng)含精制白喉類毒素30～50Lf/ml。
6.2氫氧化鋁用量不得超過3mg/ml。
6.3 吸附制品應(yīng)加0.005%～0.01%（g/ml)硫柳汞為防腐劑。
6.4 同批精制類毒素及同批吸附劑吸附的制品為1批。用大罐吸附者每罐為1批，所用精制類毒素及吸附劑可多批混合，但各不得超過3批。
7 成品檢定
7.1理化性狀
7.1.1 吸附精制白喉類毒素振蕩后應(yīng)為乳白色均勻懸液，無搖不散的凝塊或異物。
7.1.2pH值應(yīng)為6.0～7.0。
7.1.3 氫氧化鋁含量不應(yīng)超過3mg/ml。
7.1.4 氯化鈉含量為0.75%～0.9%（g/ml)。
7.1.5硫柳汞含量不應(yīng)超過0.01%（g/ml)。
7.1.6 游離甲醛含量不應(yīng)超過0.02%（g/ml)。
7.2 無菌試驗(yàn)
按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。
7.3 安全試驗(yàn)
每亞批取樣等量混合，用體重300～400g健康豚鼠4只，每只腹側(cè)皮下注射2.5ml，觀察30天，注射部位可有浸潤f1411.cn/shouyi/，經(jīng)5～10天變成硬結(jié)，30天可吸收不完全，在第10、20、30天稱體重，到期每只動物體重比注射前增加，豚鼠無晚期麻痹者評為合格。
7.4 效力試驗(yàn)
每亞批取www.med126.com樣等量混合，用體重300～350g健康豚鼠5只，每只皮下注射0.1ml，第30天各皮下攻擊200MLD白喉毒素，觀察7日，攻毒后動物死亡數(shù)不應(yīng)超過20%。同時(shí)另用體重240～270g健康豚鼠3只，各皮下攻擊1MLD白喉毒素作對照，其中2只應(yīng)在96小時(shí)內(nèi)死亡，允許1只晚死或發(fā)病。
亦可按WHO推薦的效力試驗(yàn)方法（見附錄)進(jìn)行。
7.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)
生產(chǎn)工藝有改變時(shí)應(yīng)做穩(wěn)定性試驗(yàn)。抽三批不同批號的精制類毒素配制的成品，保存于2～8℃，在效期結(jié)束之日進(jìn)行效力檢定，應(yīng)符合規(guī)程要求。
7.6 鑒別試驗(yàn)
抽取樣品加構(gòu)櫞酸鈉將吸附劑溶解后作絮狀試驗(yàn)，或?qū)悠氛{(diào)pH至9.0作凝膠免疫沉淀試驗(yàn)，以出現(xiàn)絮狀反應(yīng)或免疫沉淀反應(yīng)者為合格。
8 保存與效期
保存于2～8℃。自吸附之日起效期為3年。
