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中國生物制品規(guī)程:人血白蛋白多聚體含量及人血丙種球蛋白中l(wèi)gG各組份測定(高壓液相凝膠柱色譜法)

1 儀器1.1 高壓液相泵1.2 高壓液相色譜f1411.cn/hushi/柱:TSKG3000SW(直徑7.5mm,長60cm)。TSk Guard Column SW(直徑7.5mm,長7.5cm)。2 試劑2.1 貯存液A:0.5mol /L NaH2PO4,pH4.8稱39g NaH2PQ4·2H2O,用超純水溶解,并稀釋至500ml。2.2 貯存液B:…

1 儀器

1.1 高壓液相泵

1.2 高壓液相色譜f1411.cn/hushi/柱:TSKG3000SW(直徑7.5mm,長60cm)。TSk Guard Column SW(直徑7.5mm,長7.5cm)。

2 試劑

2.1 貯存液A:0.5mol /L NaH2PO4,pH4.8

稱39g NaH2PQ4·2H2O,用超純水溶解,并稀釋至500ml。

2.2 貯存液B:0.5mol /L Na2HPO4

稱179.1g Na2HPO4·12H2O,用超純水溶解,并稀釋至1000ml。

2.3 工作液C:0.2mol /L 磷酸鹽緩沖液,Ph7.0(含1%異丙醇)

準(zhǔn)確量取200ml貯存液A、420ml貯存液B、914.5ml超純水、15.5ml異丙醇,混勻,用0.45μm水溶性膜過濾并超聲脫氣。

3 樣品處理

用生理鹽水將樣品稀釋至4mg/ml,然后用0.45μm水溶性膜過濾。

4 操作

用工作液C以0.6ml/分鐘流速平衡高壓液相系統(tǒng)至基線平穩(wěn)。取處理過的樣品25μl上柱,用工作液C以0.6ml/分鐘流速洗脫,同時(shí)在紫外檢測器f1411.cn/shouyi/280nm波長下記錄色譜圖及有關(guān)數(shù)據(jù)。記錄數(shù)據(jù)的時(shí)間為60分鐘。

5 計(jì)算

5.1 人血白蛋白多聚體含量計(jì)算

用高壓液相系統(tǒng)的色譜工作站或積分儀對試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,算出多聚體相對面積百分含量。再根據(jù)轉(zhuǎn)化公式換算成相對重量百分含量。

轉(zhuǎn)化公式*X(%)=Y-1.6504/1.6359

其中X為凱氏定氮結(jié)果,Y為高壓液相結(jié)果(如Y值小于1.6504,結(jié)果不用轉(zhuǎn)化成重量百分含量,但在試驗(yàn)報(bào)告中需注明為相對面積百分含量)。

5.2 人血丙種球蛋白中IgG各組份相對含量計(jì)算。

5.2.1IgG各組份峰的劃界。

圖譜中各峰的界限為兩峰間最低點(diǎn)到基線的垂直線。

5.2.2IgG各組份相對含量計(jì)算。

用高壓液相系統(tǒng)的色譜工作站或積分儀對試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,算出各組份相對百分含量。

*應(yīng)根據(jù)各單位使用的HPLC儀器及層析柱型號,經(jīng)試驗(yàn)后得出轉(zhuǎn)化公式。

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