免疫學(xué)和免疫學(xué)檢驗(yàn):第三節(jié)　抗血清的鑒定和保存

一、抗血清的鑒定

動(dòng)物血采集后，立即分離出血清，此抗血清在保存或應(yīng)用前，必須作效價(jià)和特異性鑒定。

（一)雙向免疫擴(kuò)散法鑒定抗體的特異性f1411.cn/kuaiji/

按雙向免疫擴(kuò)散技術(shù)打兩排孔，上排放抗原粗提物（如抗原來(lái)自動(dòng)物血清則放相應(yīng)的混合血清)和純化抗原，下排加抗血清，進(jìn)行雙擴(kuò)散18～24h后，仔細(xì)觀察上下兩排孔之間出現(xiàn)的沉淀線。若與粗抗原及純抗原之間皆出現(xiàn)一條沉淀線，且兩者互相融合，則證明該動(dòng)物已產(chǎn)生單價(jià)特異性抗體；不出現(xiàn)沉淀線，表明示免疫成功。若與純化抗原出現(xiàn)一條，而與粗抗原出現(xiàn)多條線，且其中一條沉淀線與純抗原沉淀線相連接，也是成功的免疫，待取血后將雜抗體吸收去除，可以成為單價(jià)特異性抗體。

（二)雙向免疫擴(kuò)散法則定抗血清效價(jià)

測(cè)定抗血清效價(jià)有兩種稀釋方法：一是稀釋抗血清，如1/2、1/4、1/8、1/16對(duì)倍稀釋?zhuān)�分別與一個(gè)濃度的純抗原反應(yīng)；另一是稀釋抗原，即把抗原作對(duì)倍稀釋或按濃度（如mg/ml)進(jìn)行稀釋?zhuān)�分別與不同濃度的抗血清進(jìn)行雙擴(kuò)散試驗(yàn)（稱(chēng)為棋盤(pán)滴定)，見(jiàn)表10-1。

表10-1抗血清效價(jià)測(cè)定

表中＋～＋＋＋代表出現(xiàn)沉淀線的濃度，如1:8抗體出現(xiàn)中等濃度沉淀線，與1:16、1:32則出現(xiàn)較弱的沉淀線。按表1f1411.cn/job/0-1的互為比例稀釋后確定抗血清的效價(jià)為1:32，最佳抗原濃度為1:16。效價(jià)在1:8以上即可采用于一般試驗(yàn)。

（三)其他鑒定方法

有時(shí)，因抗原特殊，沉淀線不易出現(xiàn)，特別是制備的抗血清將用于某種試驗(yàn)時(shí)，則考慮用其它方法（如血凝試驗(yàn)、抑制試驗(yàn)、中和試驗(yàn)、放射免疫技術(shù)等)測(cè)定其效價(jià)。

二、抗血清的保存

抗血清保存有三種方法。第一種是4℃保存，將抗血清清除菌后，液體狀態(tài)保存于普通冰箱，可以存放3個(gè)月到半年，效價(jià)高時(shí)，一年之內(nèi)不會(huì)影響使用。保存時(shí)要加入0.1％～0.2％NaN₃以防腐。如若加入半量的甘油則保存期可延長(zhǎng)。第二種方法是低溫保存，放在－20～－40，一般保存5年效價(jià)不會(huì)有明顯下降，但應(yīng)防止反復(fù)凍融，反復(fù)凍融幾次則效價(jià)明顯降低。因此低溫保存應(yīng)用小包裝，以備取出后在短期內(nèi)用完。第三種方法是冰凍干燥，最后制品內(nèi)水分不應(yīng)高于0.2％，封裝后可以長(zhǎng)期保存，一般在冰箱中5～10年內(nèi)效價(jià)不會(huì)明顯降低。