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免疫學和免疫學檢驗:第二節(jié) 化學發(fā)光底物

在化學發(fā)光反應中參與能量轉移并最終以發(fā)射光子的形式釋放能量的化合物稱為化學發(fā)光劑或發(fā)光底物。在發(fā)光免疫技術中常用的化學發(fā)光底物有以下幾類。1.氨基苯二酰肼類主要是魯米諾及異魯米諾衍生物,是最常用的一類化學發(fā)光劑。魯米諾(luminol,5'-氨基-2,3-二氫-1,…

在化學發(fā)光反應中參與能量轉移并最終以發(fā)射光子的形式釋放能量的化合物稱為化學發(fā)光劑或發(fā)光底物。在發(fā)光免疫技術中常用的化學發(fā)光底物有以下幾類。

1.氨基苯二酰肼類主要是魯米諾及異魯米諾衍生物,是最常用的一類化學發(fā)光劑。魯米諾(luminol,5'-氨基-2,3-二氫-1,4-酞嗪二酮)的分子結構及化學反應式如下:

魯米諾在免疫測定中既可用作標記物,也可用作過氧化物酶的底物。異魯米諾衍生物ASEI和ABMI等也是常用的標記物。

2.吖啶酯(acridiniumesf1411.cn/yaoshi/ter,AE)類這類發(fā)光劑不需催化劑的存在,在有過氧化氫的稀堿溶液中即能發(fā)光。反應式如下:

圖18-1 電化學發(fā)光原理

上式反應迅速,在1~5s內即可完成;具有背景低、信比高的優(yōu)點,其檢測極限可達5×10-9mol,發(fā)光量與AE濃度呈良好的線性反應,是一類的標記物。

3.電化學發(fā)光(electrochemiluminescence,ECL)反應在電極表面進行。發(fā)光底物為三聯吡啶釕[Ru(bpy)32+],另一反應物為三丙胺(TPA)。在陽電極表面,以上兩化學物質可同時失去電子發(fā)生氧化反應(圖18-1)。二價的Ru(bpy)32+被氧化成三價Ru(bpy)33+,TPA被氧化成陽離子自由基TPA+,后者失去一個質子(H+),成為自由基TPA,這是一個強還原劑,可將一個電子遞給三價的Ru(bpy)32+*,而TPA自身被氧化成TPA氧www.med126.com化產物。激發(fā)態(tài)的Ru(bpy)32+*在衰減時發(fā)射一個波長為620nm的光子,重新生成基態(tài)的Ru(bpy)32+。這一過程在電極表面周而復始地進行,產生許多光子,使信號得以增強。

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