豬藍(lán)耳病毒的分離與鑒定是怎樣的?
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目前多將豬原代肺泡巨噬細(xì)胞、CL2621細(xì)胞系和Marc145細(xì)胞用于該病毒培養(yǎng)的分離。 細(xì)胞培養(yǎng)法：病毒分離樣品選擇和采取的所有操作應(yīng)為無(wú)菌規(guī)程進(jìn)行。用免疫組化技術(shù)檢查發(fā)現(xiàn)，病毒存在于病豬的肺泡巨噬細(xì)胞，細(xì)支氣管上皮、肺泡上皮細(xì)胞，脾臟的紅髓及邊緣區(qū)的巨噬細(xì)胞內(nèi)。①病毒分離的首選材料是肺、扁
桃體、脾、淋巴結(jié)和血清，死產(chǎn)和
流產(chǎn)胎兒的脾肺血清和胸水是適宜的檢驗(yàn)材料，弱胎豬和有呼吸道癥狀的急性感染豬的檢出率最高。②常用細(xì)胞培養(yǎng)法的細(xì)胞系：已知PRRS病毒能在
豬肺泡巨噬細(xì)胞(PAM)、傳代細(xì)胞CL2621和Marc145等細(xì)胞系生長(zhǎng)。③病毒的分離取流產(chǎn)胎兒，新生仔豬的肺、脾、肝、腎、心、腦、扁桃體、支氣管、淋巴結(jié)、胸腺和骨髓勻漿制成懸液，進(jìn)行分離病毒。用含抗生素的維持液（含2%胎
牛血清隨MEM營(yíng)養(yǎng)液)做1:10稀釋，4500r/min離心30min，經(jīng)0.45nm濾膜過(guò)濾，上清用MEM做1：30稀釋，接種于豬肺泡巨噬細(xì)胞(PAM)或CL2621、MA104細(xì)胞單層，于35℃吸附24h，加含4%胎牛血清的MEM，培養(yǎng)7d，觀察CPE。首次傳代有時(shí)可能無(wú)CPE，需
盲傳2-3代。不同的毒株可能適應(yīng)不同的細(xì)胞系，有些毒株僅能在PAM或僅能在CL2621細(xì)胞中生長(zhǎng)，歐洲株在PAM_上的復(fù)制速度更快、效率更高，而CL2621更有利于北美毒株的分離。出現(xiàn)CPE并能被特異的抗血清中和的樣品即為PRRS病毒。也可將分離到的病毒用免疫過(guò)氧化物酶單層細(xì)胞試驗(yàn)進(jìn)行鑒定。大多數(shù)分離物都能適應(yīng)PAM，尤其是用血清作為分離樣品，但不同的毒株對(duì)不同細(xì)胞是有選擇的。有的只能在一種細(xì)胞上生長(zhǎng)，有的可在多種細(xì)胞上生長(zhǎng)。以血清和肺組織分離成功率最高，木乃伊胎最低�？捎糜诓《捐b定的技術(shù)有單克隆抗體或多克隆抗體免疫熒光抗體技術(shù)和單層過(guò)氧化物酶試驗(yàn)，RT-PCR技術(shù)以及電鏡技術(shù)。
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學(xué)習(xí)了，
畜牧導(dǎo)航:
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