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參與蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的蛋白質(zhì)亞群的分離方法

公開(公告)號 CN1658892A  
公開(公告)日 2005.08.24  
申請(專利)號 CN02829465.3  
申請日期 2002.08.14  
專利名稱 參與蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的蛋白質(zhì)亞群的分離方法  
主分類號 A61K38/00  
分類號 A61K38/00;C07K1/00;C07K14/00;C07K17/00;G01N33/53;G01N33/543;G01N33/566  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 布朗歇特洛克菲勒神經(jīng)科學(xué)研究所  
發(fā)明(設(shè)計)人 D·L·阿爾康;T·J·尼爾森  
地址 美國馬里蘭州  
頒證日  
國際申請 PCT/US2002/025845 2002.8.14  
進(jìn)入國家日期 2005.02.16  
專利代理機(jī)構(gòu) 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司  
代理人 余穎  
國省代碼 美國;US  
主權(quán)項 一種從蛋白質(zhì)混合物中分離亞群的方法,此亞群實質(zhì)上由參與蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的蛋白質(zhì)組成,其特征在于,所述方法包括:(a)在允許(i)蛋白質(zhì)共價結(jié)合支持物,和(ii)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的條件下使混合物與化學(xué)反應(yīng)性支持物接觸;(b)允許混合物中的蛋白質(zhì)共價結(jié)合支持物;(c)將支持物和任何未與之結(jié)合的蛋白質(zhì)分離;(d)將支持物置于破壞蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的條件下;和(e)將支持物和任何未與之結(jié)合的蛋白質(zhì)分離。  
摘要 本發(fā)明提供了在復(fù)合體混合物中分離和鑒定參與蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的蛋白質(zhì)的方法。該方法使用化學(xué)反應(yīng)性支持基質(zhì)來分離蛋白質(zhì),蛋白質(zhì)隨后非共價結(jié)合其它蛋白質(zhì)。分離支持基質(zhì),隨后將非共價結(jié)合的蛋白質(zhì)釋放用于分析。由于在結(jié)合和釋放步驟中都可通過化學(xué)操作影響蛋白質(zhì),鑒定非共價結(jié)合蛋白產(chǎn)生關(guān)于特定相互作用蛋白質(zhì)種類的信息,如鈣依賴或底物依賴性蛋白質(zhì)相互作用。這允許在特定相互作用標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上從復(fù)合體混合物中選擇蛋白質(zhì)亞群。此方法優(yōu)勢是能同時篩選完整蛋白質(zhì)組,不像雙雜交系統(tǒng)或噬菌體展示方法,它們每次僅能檢測結(jié)合單一釣餌蛋白。該方法可應(yīng)用于研究活組織切片和尸體解剖樣本中的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,研究信號分子、藥物試劑或毒素存在時的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,用于比較患病和正常組織或癌和未轉(zhuǎn)化細(xì)胞。  
國際公布 WO2004/019967 英 2004.3.11  
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