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在蛋白質(zhì)如病原性/傳染性蛋白質(zhì)中誘導(dǎo)構(gòu)象轉(zhuǎn)變的方法

公開(公告)號 CN1665838A  
公開(公告)日 2005.09.07  
申請(專利)號 CN03816241.5  
申請日期 2003.07.03  
專利名稱 在蛋白質(zhì)如病原性/傳染性蛋白質(zhì)中誘導(dǎo)構(gòu)轉(zhuǎn)變的方法  
主分類號 C07K14/47  
分類號 C07K14/47;G01N33/68  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán) 2002.7.11 US 60/395,203  
申請(專利權(quán))人 瑞士聯(lián)邦蘇黎世技術(shù)大學(xué)  
發(fā)明(設(shè)計)人 R·扎恩;T·呂爾斯  
地址 瑞士蘇黎世  
頒證日  
國際申請 PCT/EP2003/007077 2003.7.3  
進(jìn)入國家日期 2005.01.10  
專利代理機(jī)構(gòu) 中國專利代理(香港)有限公司  
代理人 曹雯;劉玥  
國省代碼 瑞士;CH  
主權(quán)項 一種在重組蛋白質(zhì)和/或其變體中誘導(dǎo)構(gòu)象轉(zhuǎn)變的體外方法,其中所述的構(gòu)象轉(zhuǎn)變導(dǎo)致β折疊二級結(jié)構(gòu)含量的增加,該方法包括步驟:a)提供一種轉(zhuǎn)變緩沖液;b)向轉(zhuǎn)變緩沖液中加入含有帶負(fù)電荷脂質(zhì)的層狀脂質(zhì)結(jié)構(gòu)的溶液;c)向轉(zhuǎn)變緩沖液中加入重組的蛋白質(zhì)分子和/或其變體;d)由轉(zhuǎn)變緩沖液、添加的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)分子形成一種樣品混合物;e)在樣品混合物中確定轉(zhuǎn)變溫度;和將步驟d)的樣品混合物置于根據(jù)步驟e)的轉(zhuǎn)變溫度下足夠的時間以形成構(gòu)象轉(zhuǎn)變的蛋白質(zhì);其中形成層狀脂質(zhì)結(jié)構(gòu)和構(gòu)象轉(zhuǎn)變的蛋白質(zhì)的水溶性復(fù)合物,構(gòu)象轉(zhuǎn)變的蛋白質(zhì)為寡聚的β折疊中間態(tài)結(jié)構(gòu)。  
摘要 本發(fā)明涉及一種在蛋白質(zhì)中誘導(dǎo)構(gòu)象轉(zhuǎn)變的體外方法,而所述構(gòu)象轉(zhuǎn)變導(dǎo)致β折疊二級結(jié)構(gòu)的含量升高,該方法包括步驟:a)提供一種轉(zhuǎn)變緩沖液;b)向轉(zhuǎn)變緩沖液中加入含有帶負(fù)電荷脂質(zhì)的層狀脂質(zhì)結(jié)構(gòu)的溶液;c)向轉(zhuǎn)變緩沖液中加入蛋白質(zhì)分子;d)由轉(zhuǎn)變緩沖液、添加的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)分子形成一種樣品混合物;e)在樣品混合物中確定轉(zhuǎn)變溫度;和f)將步驟d)的樣品混合物置于根據(jù)步驟e)的轉(zhuǎn)變溫度下足夠的時間以形成構(gòu)象轉(zhuǎn)變的蛋白質(zhì)。通過這一方法,形成了層狀脂質(zhì)結(jié)構(gòu)和構(gòu)象轉(zhuǎn)變蛋白質(zhì)的水溶性復(fù)合物,所述構(gòu)象轉(zhuǎn)變的蛋白質(zhì)為寡聚的β折疊中間型結(jié)構(gòu)?梢酝ㄟ^有效地破壞層狀脂質(zhì)結(jié)構(gòu)由層狀脂質(zhì)結(jié)構(gòu)和寡聚的β折疊中間型結(jié)構(gòu)的水溶性復(fù)合物產(chǎn)生淀粉樣聚集物。這類蛋白質(zhì)可能涉及神經(jīng)變性疾病像傳播性海綿狀腦病(TSE)、阿爾茨海默癥、多發(fā)性硬化癥和帕金森病。說明書包括通過該方法生產(chǎn)的蛋白質(zhì)的應(yīng)用,例如,開發(fā)PrPC向PrPSc轉(zhuǎn)變的不同相;開發(fā)新的用于診斷的TSE檢測方法以及抗TSE如人克-雅氏病的潛在的治療方法和預(yù)防方法。  
國際公布 WO2004/007545 英 2004.1.22  
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