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用新的復(fù)性方法制備重組人神經(jīng)生長因子

公開(公告)號(hào) CN1219795C  
公開(公告)日 2005.09.21  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN00111220.1  
申請(qǐng)日期 2000.07.19  
專利名稱 用新的復(fù)性方法制備重組人神經(jīng)生長因子  
主分類號(hào) C07K14/48  
分類號(hào) C07K14/48;A61K38/18;A61P25/00  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 深圳市海王英特龍生物技術(shù)股份有限公司  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 王革  
地址 518054 廣東省深圳市南山區(qū)南油大道海王大廈24層  
頒證日  
國際申請(qǐng)  
進(jìn)入國家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 廣州市拓元專利事務(wù)所  
代理人 張少君  
國省代碼 廣東;44  
主權(quán)項(xiàng) 一種通過二硫鍵異構(gòu)酶PDI催化復(fù)性制備重組人神經(jīng)生長因子rhNGF的方法,包括步驟①通過工程菌大腸桿菌表達(dá)rhNGF,②進(jìn)行菌體破碎,③通過離心分離包含體,④利用變性體系變性溶解,⑤PDI催化復(fù)性,⑥脫鹽以及⑦陽離子交換層析,其特征在于:步驟④的變性體系含有1-10M尿素,5-50mMTris,1-5mMEDTA,且pH7-10;步驟⑤中rhNGF與PDI的摩爾比為100∶1-10∶1;步驟⑦的交換層析采用CM-Sepharose陽離子交換柱,洗脫條件為O-1MNaCl,pH4-8。  
摘要 一種通過二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)催化復(fù)性制備重組人神經(jīng)生長因子(rhNGF)的方法,包括步驟①通過工程菌大腸桿菌表達(dá)rhNGF,②進(jìn)行菌體破碎,③通過離心分離包含體,④利用變性體系變性溶解,變性體系含有1-10M尿素,5-50mM Tris,1-5mM EDTA,且pH 7-10;⑤PDI催化復(fù)性,rhNGF與PDI的摩爾比為100∶1-10∶1;⑥脫鹽以及⑦陽離子交換層析,采用CM-Sepharose陽離子交換柱,洗脫條件為0-1M NaCl,pH4-8。經(jīng)上述步驟,即可制備得到純度大于95%,具天然生物學(xué)活性的rhNGF。采用此方法降低了成本,并可應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。  
國際公布  
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