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檢測(cè)HBV復(fù)制和測(cè)試藥物敏感性的方法

公開(公告)號(hào) CN1701124A  
公開(公告)日 2005.11.23  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN03824462.4  
申請(qǐng)日期 2003.09.26  
專利名稱 檢測(cè)HBV復(fù)制和測(cè)試藥物敏感性的方法  
主分類號(hào) C12Q1/70  
分類號(hào) C12Q1/70  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán) 2002.9.27 EP 02356188.9  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 國(guó)家健康醫(yī)學(xué)研究所  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 D·迪朗泰爾;S·迪朗泰爾;C·特雷波;F·祖里姆  
地址 法國(guó)巴黎  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng) 2003-09-26 PCT/EP2003/012398  
進(jìn)入國(guó)家日期 2005.04.21  
專利代理機(jī)構(gòu) 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所  
代理人 程 泳  
國(guó)省代碼 法國(guó);FR  
主權(quán)項(xiàng) 可能存在藥物產(chǎn)品優(yōu)選地抗病毒劑的情況下,用于測(cè)量HBV復(fù)制能力的方法,所述HBV例如為存在于生物樣品中的HBV,該方法包括:(a)可能地提取包含在生物樣品中的核酸;(b)使用至少兩對(duì)引物進(jìn)行PCR以擴(kuò)增HBV核酸,所選的所述兩對(duì)引物能夠獲得至少兩個(gè)不同的HBV基因組擴(kuò)增片段,這兩個(gè)片段通過組裝代表了一個(gè)線性連續(xù)的、能轉(zhuǎn)錄出pgRNA的DNA序列;(c)將由(b)中獲得的片段克隆入載體,該片段處于異源啟動(dòng)子控制下,因此產(chǎn)生包含一段線性連續(xù)的、在所述啟動(dòng)子控制下的能轉(zhuǎn)錄出pgRNA的DNA序列的載體;(d)用所述載體轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)感受態(tài)細(xì)胞;(e)在允許從克隆的HBVDNA合成HBVpgRNA的條件下培養(yǎng)轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞;(f)可能地用藥物產(chǎn)品特別是抗病藥劑處理培養(yǎng)細(xì)胞;并且(g)可能地在藥物產(chǎn)品優(yōu)選地抗病毒劑存在的情況下,根據(jù)病毒基因表達(dá)和/或病毒復(fù)制的情況確定HBV的復(fù)制能力。  
摘要 可能在有藥物產(chǎn)品優(yōu)選地抗病毒劑存在的情況下,用于測(cè)量HBV復(fù)制能力的方法,例如存在于生物樣品中的HBV。該方法包括:(a)可能地提取包含在生物樣品中的核酸;(b)使用至少兩對(duì)引物進(jìn)行PCR以擴(kuò)增HBV的核酸,所選的兩對(duì)引物能夠獲得至少兩個(gè)不同的HBV基因組擴(kuò)增片段,這兩個(gè)片段通過組裝代表了一個(gè)線性連續(xù)的、能轉(zhuǎn)錄出pgRNA的DNA序列;(c)將由(b)中獲得的片段克隆入載體,該片段處于異源啟動(dòng)予控制下,于是就產(chǎn)生一個(gè)包含一段線性連續(xù)的、在所述啟動(dòng)子控制下能轉(zhuǎn)錄出pgRNA的DNA序列的載體;(d)用所述載體轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)感受態(tài)細(xì)胞;(e)在允許從克隆的HBV DNA合成HBV pgRNA的條件下培養(yǎng)轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞;(f)可能地用藥物產(chǎn)品特別是抗病毒劑處理培養(yǎng)細(xì)胞;并且(g)可能地在藥物產(chǎn)品優(yōu)選地抗病毒劑存在的情況下,根據(jù)病毒基因表達(dá)和/或病毒復(fù)制的情況確定HBV的復(fù)制能力。  
國(guó)際公布 2004-04-08 WO2004/029301 英  
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