公開(公告)號(hào)
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CN1231598C
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公開(公告)日
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2005.12.14
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN03131899.1
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申請(qǐng)日期
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2003.06.13
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專利名稱
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一種重組禽腺病毒的制備方法
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主分類號(hào)
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C12Q1/68
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分類號(hào)
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C12Q1/68;C12N15/861;C12N7/01
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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揚(yáng)州大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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秦愛建;何秀苗;劉岳龍;金文杰
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地址
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225009江蘇省揚(yáng)州市大學(xué)南路88號(hào)
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頒證日
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國際申請(qǐng)
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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揚(yáng)州市錦江專利事務(wù)所
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代理人
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江 平
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國省代碼
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江蘇;32
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主權(quán)項(xiàng)
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一種重組禽腺病毒的制備方法,其特征在于由以下步驟完成:1)以中國雞群分離的I群禽腺病毒為材料,通過PCR方法將病毒基因組的兩個(gè)末端,即L片段和r片段,以及右ITR片段擴(kuò)增出來,克隆進(jìn)載體,并以報(bào)告基因EGFP插入設(shè)計(jì)好的r片段和右ITR片段之間,構(gòu)建轉(zhuǎn)移質(zhì)粒載體;2)將構(gòu)建的禽腺病毒轉(zhuǎn)移質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染已被野生病毒感染了的雞胚腎細(xì)胞,進(jìn)行同源重組,篩選重組病毒;上述擴(kuò)增基因組左末端L片段的上、下游引物分別是:PL1:5’ggggcggccgcgatgatgtataataacct3’PL2:5’gggtctagactcacgcgacatgactgtct3’上述擴(kuò)增基因組右末端r片段的上、下游引物分別是:Pr1:5’gcgtctagaccagaaccattcttcagccg3’PL2:5’gcggaattcgtaccggactgttgtgcgga3’上述擴(kuò)增基因組右ITR片段的上、下游引物分別是:PITR1:5’gcggaattcacacacggacaacttcaaag3’PITR2:5’gcggtcgacgatgatgtataataacctc3’。
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摘要
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)制藥工業(yè)中的基因工程生產(chǎn)疫苗藥物的技術(shù)領(lǐng)域。以中國分離的I群禽腺病毒為材料,通過PCR方法將該病毒基因組的兩個(gè)末端L片段和r片段、ITR片段擴(kuò)增出來,克隆進(jìn)pHC粘粒載體中,并以增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(eGFP)基因?yàn)閳?bào)告基因,插入設(shè)計(jì)好的r片段和ITR片段之間,構(gòu)建轉(zhuǎn)移質(zhì)粒載體pFAV-eGFP,然后轉(zhuǎn)染已被野生病毒感染了的雞胚腎細(xì)胞,進(jìn)行同源重組,篩選重組病毒,獲得表達(dá)增強(qiáng)型綠色熒光蛋白的重組禽腺病毒。從而確定位于基因組右末端r片段和ITR片段之間的位點(diǎn)為病毒復(fù)制非必需區(qū),并以此為載體開發(fā)研制相關(guān)基因工程產(chǎn)品。
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國際公布
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