公開(公告)號
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CN1233826C
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公開(公告)日
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2005.12.28
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申請(專利)號
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CN02108141.7
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申請日期
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2002.03.27
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專利名稱
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一種重組畢赤酵母乳糖酶及其應(yīng)用
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主分類號
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C12N9/38
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分類號
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C12N9/38;C12N15/56;//(C12N9/38,C12R1:85)
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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范云六;姚 斌;張 偉;趙 軍
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地址
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100081北京市中關(guān)村南大街12號
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頒證日
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司
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代理人
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姜兆元
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國省代碼
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北京;11
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主權(quán)項(xiàng)
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一種發(fā)酵生產(chǎn)乳糖酶的方法,包括以下步驟:a.將含有乳糖酶編碼基因的重組酵母菌株接種培養(yǎng),然后按5~10%接種量再接種于含3~5%葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基10×Basalsalts中;b.通氣攪拌培養(yǎng),在整個(gè)培養(yǎng)過程中氧飽和度不低于20%;c.14~24小時(shí)后,按照12~24mL/hr/L的流量流動加入18~35%的葡萄糖溶液繼續(xù)培養(yǎng)2~8小時(shí);d.按照2~8mL/hr/L的流量流動加入18~35%葡糖糖∶甲醇=2~6∶1~4混合溶液,繼續(xù)培養(yǎng)2~8小時(shí);e.加入誘導(dǎo)劑甲醇,使甲醇的終濃度維持在0.1~0.5%,繼續(xù)培養(yǎng)至少5小時(shí);其中,所述乳糖酶編碼基因基于下述核苷酸序列:1ATGAAGCTCCTCTCTGTTGCTGCTGTTGCCTTGCTGGCGGCACAGGCAGCGGGTGCTTCCATCAAGCATCGTCTCAATGGCTTCACGATC91CTGGAACATCCGGATCCGGCGAAAAGAGACTTGCTGCAAGACATTGTATGTCGTCATCAAATCTGAATCACTAGCTATGCTCCATAGTGA181TTATGTAAACATACTGACCCTCTGCAGGTTACATGGGATGACAAATCTCTGTTCATCAATGGAGAGAGGATTATGTTATTCAGCGGAGAA271GCATCCTTTCAGGTACACTAGCCCCGCGTACTTCTATGGTTTAATTCTGATGAAAACAGATTGCCAGTACCTTCGCTTTGGCTTGATA361TTCCACAAGATCAGAGCTCTTGGTTTCAACTGTGTATCTTTCTATATTGATTGGGCTCTTCTGGAGGGAAAGCCTGGCGACTACAGAG452GAAGGCATCTTTGCTCTGGAACCCTTCTTCGATGCAGCCAAGGAAGCAGGCATTTATCTGATCGCCCGCCCCGGTTCGTACATCAATG541CCGAGGTCTCAGGCGGTGGCTTCCCTGGATGGTTGCAGAGGGTCAATGGCACTCTTCGCTCGTCTGATGAGCCATTCCTTAAAGCTACTG631AAGTATGGGCTCATTGATGAGCTACTTCAGACACTTGCTTACAGTGTGATTTTAGCTATATCGCCAATGCCGCTGCTGCCGTGGCGAA721GGCTCAAATCACGAATGGAGGGCCAGTAATTCTCTACCAGCCCGAAAACGAATACAGCGGTGGCTGCTGCGGTGTCAAATACCCCGATGC811AGACTACATGCAGTATGTTATGGATCAGGCCCGGAAGGCTGACATTGTTGTACCTTTCATCAGCAACGATGCCTCACCTTCTGGGCACAA901TGCTCCTGGAAGTGGAACGGGCGCTGTTGATATTTATGGTCACGATAGCTATCCGTAAGTTATTCTGCATATGAGCTCCTTTCTTTTAGA991GATTTTCCGTTTGACGGCAACTGACATTTACCTAGCCTTGGCTTTGATTGCGTATGTTCTATCCTGCGAGCGAGATTGAATACTTCTGAC1081GTATATAGGCAAACCCATCCGTATGGCCCGAGGGTAAACTGCCCGACAACTTCCGCACGCTCCATCTTGAGCAGAGCCCATCAACTCCGT1171ATTCACTTCTTGAGGTAAGTTACTACTCAGCCTCGAGGACTAGTAATGTGTCTCACTGTCTTTTAGTTCCAAGCGGGTGCTTTCGACCCA1261TGGGGTGGACCCGGCTTTGAAAAATGCTATGCCCTCGTTAACCACGAATTCTCGAGAGTTTTCTATAGGAACGACTTGAGTTTCGGAGTT1351TCTACCTTTAACTTATACATGGTATGGTCTATTCATATCTCTGGAACATACATCGCGCTGACAATATATAGACTTTCGGCGGAACAAACT1441GGGGTAACCTCGGACATCCCGGTGGATATACATCCTACGACTACGGCTCGCCTATAACTGAAACGCGAAACGTTACACGGGAGAAGTACA1531GCGACATAAAGCTCCTTGCCAACTTTGTCAAAGCATCGCCATCCTATCTCACCGCTACTCCCAGAAACCTGACTACTGGTGTTTACACAG1621ACACATCTGACCTGGCTGTCACCCCGTTAATGGGTGATAGTCCAGGCTCATTCTTCGTGGTCAGACATACGGACTATTCCAGCCAAGAGT1711CAACCTCGTACAAACTTAAGCTTCCTACCAGTGCTGGTAACCTGACTATTCCCCAGCTGGAGGGCACTCTAAGTCTCAACGGACGTGACT1801CAAAAATTCATGTTGTTGATTATAATGTGTCTGGAACGAACATTATCTATTCGACAGCTGAAGTCTTCACCTGGAAGAAGTTTGACGGTA1891ACAAGGTCCTGGTGTTATACGGCGGACCGAAGGAACACCATGAATTGGCCATTGCCTCCAAGTCAAATGTGACCATCATCGAAGGTTCGG1981ACTCTGGAATTGTCTCAACGAGGAAGGGCAGCTCTGTTATCATTGGCTGGGATGTCTCTTCTACTCGTCGCATCGTTCAAGTCGGTGACT2071TGAGAGTGTTCCTGCTTGGTAAGTGAATTCACAAGAAACTCGCGTTCACGACTAATGAATCCACAGATAGAAACTCTGCTTACAACTACT2161GGGTCCCCGAACTCCCCACAGAAGGTACTTCTCCCGGGTTCAGCACTTCGAAGACGACCGCCTCCTCCATTATTGTGAAGGCCGGCTACC2251TCCTCCGAGGGGCTCACCTGGATGGTGCTGATCTTCATCTTACTGCTGATTTCAATGCCACCACCCCGATTGAAGTGATCGGTGCTCCAA2341CAGGCGCCAAGAATCTGTTCGTGAATGGTGAAAAGGCTAGCCACACAGTCGACAAAAACGGCATCTGGAGCAGTGAGGTCAAGTACGCGG2431CTCCAGAGATCAAGCTCCCCGGTTTGAAGGATTTGGACTGGAAGTATCTGGACACGCTTCCCGAAATTAAGTCTTCCTATGATGACTCGG2521CCTGGGTTTCGGCAGACCTTCCAAAGACAAAGAACACTCACCGTCCTCTTGACACACCAACATCGCTATACTCCTCTGACTATGGCTTCC2611ACACTGGCTACCTGATCTACAGGGGTCACTTCGTTGCCAACGGCAAGGAAAGCGAATTTTTTATTCGCACACAAGGCGGTAGCGCATTCG2701GAAGTTCCGTATGGCTGAACGAGACGTATCTGGGCTCTTGGACTGGTGCCGATTATGCGATGGACGGTAACTCTACCTACAAGCTATCTC2791AGCTGGAGTCGGGCAAGAATTACGTCATCACTGTGGTTATTGATAACCTGGGTCTCGACGAGAATTGGACGGTCGGCGAGGAAACCATGA2881AGAATCCTCGTGGTATTCTTAGCTACAAGCTGAGCGGACAAGACGCCAGCGCAATCACCTGGAAGCTCACTGGTAACCTCGGAGGAGAAG2971ACTACCAGGATAAGGTTAGAGGACCTCTCAACGAAGGTGGACTGTACGCAGAGCGCCAGGGCTTCCATCAGCCTCAGCCTCCAAGCGAAT3061CCTGGGAGTCGGGCAGTCCCCTTGAAGGCCTGTCGAAGCCGGGTATCGGATTCTACACTGCCCAGTTCGACCTTGACCTCCCGAAGGGCT3151GGGATGTGCCGCTGTACTTCAACTTTGGCAACAACACCCAGGCGGCTCGGGCCCAGCTCTACGTCAACGGTTACCAGTATGGCAAGTTCA3241CTGGAAACGTTGGGCCACAGACCAGCTTCCCTGTTCCCGAAGGGATCCTGAACTACCGCGGAACCAACTATGTGGCACTGAGTCTTTGGG3331CATTGGAGTCGGACGGTGCTAAGCTGGGTAGCTTCGAACTGTCCT
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摘要
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本發(fā)明包括一種性質(zhì)優(yōu)良的乳糖酶其編碼基因的克隆、高效表達(dá)乳糖酶的重組畢赤酵母的構(gòu)建以及重組酵母的高密度發(fā)酵大量產(chǎn)生乳糖酶的方法。重組酵母中乳糖酶的表達(dá)量可達(dá)到6mg/mL發(fā)酵液。高效表達(dá)乳糖酶的重組酵母可用來大規(guī)模工業(yè)化廉價(jià)生產(chǎn)乳糖酶。
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國際公布
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