| 公開(公告)號(hào) | CN1241938C |
| 公開(公告)日 | 2006.02.15 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200410022360.8 |
| 申請(qǐng)日期 | 2004.04.20 |
| 專利名稱 | 重組幽門螺桿菌熱休克蛋白A基因工程疫苗制備中的純化方法 |
| 主分類號(hào) | C07K14/195(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C07K14/195(2006.01)I;C12P21/00(2006.01)I;C07K1/36(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 鄒全明;郭 鷹;冉向陽;朱永紅;吳 超;張衛(wèi)軍;童文德 |
| 地址 | 400038重慶市沙坪壩區(qū)高灘巖正街30號(hào)第三軍醫(yī)大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系臨床微生物學(xué)教研室 |
| 頒證日 | |
| 國際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 重慶華科專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 康海燕 |
| 國省代碼 | 重慶;85 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種重組幽門螺桿菌熱休克蛋白A基因工程疫苗制備中的純化方法，其特征在于：用發(fā)酵方式高密度表達(dá)rHspA后，采用高壓破菌、過濾，鎳離子親和層析、濃縮裂解、凝膠過濾層析及復(fù)性技術(shù)的順序組合，獲得高純度rHspA，步驟如下：(1)高壓破菌：將高效表達(dá)可溶性重組幽門螺桿菌熱休克蛋白A的大腸桿菌工程菌菌體以鎳離子親和層析平衡緩沖液混懸浮，預(yù)冷后采用細(xì)胞勻漿機(jī)使其混合均勻，用高壓均質(zhì)機(jī)破菌，高速離心，收集上清；(2)過濾：將上述上清液通過微孔濾膜過濾待用；(3)鎳離子親和層析柱純化：選擇鎳離子親和層析柱進(jìn)行初步純化，使用Tris在pH7.0～9.0條件下對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行純化，采用咪唑梯度洗脫；(4)濃縮、裂解：將步驟(3)初純化樣品濃縮后加鹽酸胍或尿素，以及DTT或β-巰基乙醇變性裂解；(5)Superdex凝膠過濾層析純化：將步驟(4)所獲得的變性蛋白樣本，用凝膠過濾柱Superdex純化，用凝膠過濾平衡緩沖液平衡；(6)復(fù)性：將步驟(5)純化樣品采用稀釋等容透析法或?qū)游鲋鶑?fù)性法復(fù)性，復(fù)性后的樣品，采用Superdex凝膠過濾層析分離單體和聚體。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了重組幽門螺桿菌熱休克蛋白A基因工程菌疫苗制備中的純化方法。采用對(duì)基因工程菌進(jìn)行高壓破菌、過濾，鎳離子親和層析純化、濃縮裂解、凝膠過濾層析及復(fù)性等技術(shù)，獲得高純度的重組幽門螺桿菌熱休克蛋白A。該發(fā)明純化工藝簡(jiǎn)捷、容易放大、重復(fù)性好，所獲目標(biāo)蛋白純度高，動(dòng)物試驗(yàn)證明本發(fā)明純化獲得的重組幽門螺桿菌熱休克蛋白A具有較好的免疫活性和免疫保護(hù)性。 |
| 國際公布 |
