| 公開(公告)號(hào) | CN1242059C |
| 公開(公告)日 | 2006.02.15 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN97192081.8 |
| 申請(qǐng)日期 | 1997.01.31 |
| 專利名稱 | rDSPAα1的產(chǎn)生方法 |
| 主分類號(hào) | C12N9/72(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N9/72(2006.01)I;C07K1/16(2006.01)I;A61K38/49(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 1996.2.5 US 08/597,059 |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 舍林股份公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | M·麥克曼;E·龐戈;C·索德斯;M·P·譚 |
| 地址 | 聯(lián)邦德國(guó)柏林 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | 1997-01-31 PCT/EP1997/000441 |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | 1998.08.05 |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所 |
| 代理人 | 李 瑛 |
| 國(guó)省代碼 | 德國(guó);DE |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種從生物培養(yǎng)基中純化重組圓形葉口蝠(Desmodusrotundus)唾液纖溶酶原活化劑α1的方法，所說的方法包括下列步驟：(a)在pH為4-7的條件下將培養(yǎng)基加入到陽離子交換樹脂上，其中陽離子交換樹脂由用羧基或者羧烷基基團(tuán)衍生化的硅凝膠微粒、交聯(lián)瓊脂糖或者交聯(lián)聚甲基丙烯酸酯聚合物組成；(b)洗滌陽離子交換樹脂以除去非重組圓形葉口蝠唾液纖溶酶原活化劑α1蛋白和非蛋白雜質(zhì)，其中洗滌緩沖液pH7.5，具有100mM乙酸鈉和50mMNa3PO4；(c)從陽離子交換樹脂選擇性地洗脫結(jié)合的重組圓形葉口蝠唾液纖溶酶原活化劑α1，其中洗脫緩沖液含有50mMNa3PO4和100mM-500mMNaCl，pH為7.5的緩沖液或相同離子強(qiáng)度的緩沖液；(d)在pH為3-5的條件下將步驟(c)中的含有重組圓形葉口蝠唾液纖溶酶原活化劑α1的洗脫液加入到疏水作用樹脂上，其中疏水作用樹脂是一種不帶電荷的的樹脂，其用長(zhǎng)度為1-10個(gè)碳原子的烷基鏈或者芳基-烷基基團(tuán)衍生化；(e)洗滌疏水作用樹脂以除去非重組圓形葉口蝠唾液纖溶酶原活化劑α1蛋白和非蛋白雜質(zhì)，其中洗滌緩沖液為含有20mMHCl的溶液和含有19％乙醇的20mMHCl的溶液；(f)從疏水作用樹脂選擇性地洗脫結(jié)合的重組圓形葉口蝠唾液纖溶酶原活化劑α1，其中洗脫緩沖液含有20mMHCl，pH2.5并具有大于25％的乙醇濃度；(g)在pH1-4和20mMHCl的低離子強(qiáng)度的條件下將步驟(f)中的含有重組圓形葉口蝠唾液纖溶酶原活化劑α1的洗脫液加入到親和層析樹脂上，其中親和層析樹脂由以直徑為25-75μm的珠形式的烯丙基葡聚糖和N，N′-亞甲基雙丙烯酰胺的交聯(lián)共聚物組成；(h)洗滌親和層析樹脂以除去非重組圓形葉口蝠唾液纖溶酶原活化劑α1蛋白和非蛋白雜質(zhì)，其中洗滌由具有20mMHCl的緩沖液完成；(i)從親和層析樹脂選擇性地洗脫結(jié)合的重組圓形葉口蝠唾液纖溶酶原活化劑α1，以產(chǎn)生水溶液形式的純化的重組圓形葉口蝠唾液纖溶酶原活化劑α1，其中洗脫緩沖液含有pH3-6的200mM甘氨酸的緩沖液或?yàn)榫哂邢嗟入x子強(qiáng)度的緩沖液。 |
| 摘要 | 以商業(yè)量和符合臨床標(biāo)準(zhǔn)的純度產(chǎn)生了rDSPAα1。該產(chǎn)生方法使用了一系列層析步驟：陽離子交換層析，其后為疏水作用層析，最后為親和層析。 |
| 國(guó)際公布 | 1997-08-14 WO1997/029188 英 |
