| 公開(公告)號 | CN1246482C |
| 公開(公告)日 | 2006.03.22 |
| 申請(專利)號 | CN200410024074.5 |
| 申請日期 | 2004.05.08 |
| 專利名稱 | 單個核細胞白細胞相容性抗原A和B特異核糖核酸檢測方法 |
| 主分類號 | C12Q1/68(2006.01)I |
| 分類號 | C12Q1/68(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 山東大學齊魯醫(yī)院 |
| 發(fā)明(設計)人 | 鄒 雄;張 義;楊曉靜 |
| 地址 | 250012山東省濟南市歷下區(qū)文化西路107號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 山東濟南齊魯科技專利事務所有限公司 |
| 代理人 | 宋永麗 |
| 國省代碼 | 山東;37 |
| 主權項 | 單個核細胞白細胞相容性抗原A和B特異核糖核酸檢測方法，首先抽取外周血，提取淋巴細胞，然后對淋巴細胞總RNA進行鑒定，當可見5s，18s，28s，三條清晰條帶，可用于逆轉錄聚合酶鏈反應，其特征在于：使逆轉錄聚合酶鏈反應體系為25微升，其中逆轉錄酶1微升，隨機引物1微升，Taq酶0.2微升，上下游引物是0.4微升，其中HLA-B和HLA-A引物均是4對，使用其中任何一對均可，HLA-B引物是：上游引物5′-CACACTGACCTGGCAGCGGGAT-3′，下游引物：5′-AGAGCCCTGGGCACTGTCGCT-3′，或者HLA-B引物是：上游引物5′-GGGCAGCTGTGGTGCCT-3′，下游引物是5′-CACTGTCGCTGCACGCAGCCT-3′，或者HLA-B引物是：上游引物5′-CTGCCGAAGCCCCTCACCCTCT-3′，下游引物是5′-AGGACCAGACCCAGGACA-3′，或者HLA-B引物是：上游引物5′-GCCGTCTTCCCAGTCCACCGT-3′，下游引物是5′-ATGCCCACGATGGGGACGGT-3′，HLA-A引物是：上游引物5′CTACCCTGCGGAGATCAC-3′，下游引物：5′-AGAGAACCAGGCCAGCAAT-3′，或者HLA-A引物是：上游引物5′-ATGAGGCGGAGCAGTTGA-3′，下游引物5′-ATGGTGGGCTGGGAAGAC-3′，或者HLA-A引物是：上游引物5′-GAGGCGGAGCAGTTGAGA-3′，下游引物5′-GGAAGGGCAGGAACAACTC-3′，或者HLA-A引物是：上游引物5′-GGAGGACCAGACCCAGGACA-3′，下游引物5’-ATGGTGGGCTGGGAAGAC-3’，其中RNA是10微升，得出多聚酶鏈反應參數(shù)是42℃30min，95℃3min，94℃1min，55℃1min，72℃1min，5個循環(huán)，94℃10sec，60℃40sec，40個循環(huán)，72℃5min，對擴增產物電泳掃描及序列分析，最后進行熒光定量檢測，以引物為基礎合成熒光探針，建立熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應，獲得檢測結果。 |
| 摘要 | 本發(fā)明是單個核細胞白細胞相容性抗原A和B特異核糖核酸檢測方法，一、外周血淋巴細胞(PBL)的提取，二、外周血淋巴細胞總RNA的鑒定，三、優(yōu)化后的聚合酶鏈反應(PCR)擴增體系，四、擴增產物的電泳掃描及序列分析，五、熒光定量檢測。采用本發(fā)明檢測方法，檢測結果是用1-2％瓊脂糖凝膠電泳，正常人在287bp處可見明顯亮帶，免疫力低的人群則明顯減弱或缺失，以此結果，可以判斷是否是腫瘤患者，若是腫瘤患者篩選生物治療的藥物或治療方法，可以提高腫瘤患者針對性的治療效果，對尚未有臨床癥狀的人群，提供應當增強免疫力的警示，對研究人員可以提供尋求提高細胞免疫力的中草藥等。本發(fā)明可以普遍應用于健康查體。 |
| 國際公布 |
