| 公開(公告)號(hào) | CN100335631C |
| 公開(公告)日 | 2007.09.05 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN97181012.5 |
| 申請(qǐng)日期 | 1997.10.29 |
| 專利名稱 | 三股螺旋蛋白的穩(wěn)定表達(dá) |
| 主分類號(hào) | C12N15/12(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N15/12(2006.01)I;C12N15/81(2006.01)I;C12N15/53(2006.01)I;C07K14/78(2006.01)I;A61K38/39(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 1996.10.29 AU PO3310;1996.12.19 AU PO4306 |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 聯(lián)邦科學(xué)及工業(yè)研究組織 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | P·R·沃恩;M·加拉尼斯;J·A·M·拉姆肖;J·A·維爾克梅斯特 |
| 地址 | 澳大利亞澳大利亞首都直轄區(qū) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | 1997-10-29 PCT/AU1997/000721 |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | 1999.06.24 |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 中國(guó)專利代理(香港)有限公司 |
| 代理人 | 盧新華;齊曾度 |
| 國(guó)省代碼 | 澳大利亞;AU |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種在酵母中生產(chǎn)羥化三股螺旋蛋白的方法，該方法包括以下步驟：將以下成分導(dǎo)入一種合適的酵母宿主細(xì)胞：與在所述酵母宿主細(xì)胞中有功能的啟動(dòng)子可操作地連接的編碼P4Hα亞基的第一核苷酸序列，與在所述酵母宿主細(xì)胞中有功能的啟動(dòng)子可操作地連接的編碼P4Hβ亞基的第二核苷酸序列，與在所述酵母宿主細(xì)胞中有功能的啟動(dòng)子可操作地連接的編碼合成肽的第三核苷酸序列，所述肽具有以下通式，并且在羥化以后生成所述羥化三股螺旋蛋白：(A)l(B)m(GlyXY)n(C)o(D)p，其中，(GlyXY)n表示三股螺旋形成重復(fù)序列，其中Gly表示甘氨酸，其中X和Y可相同或不同，各自表示一個(gè)氨基酸，且其中在GlyXY三聯(lián)體與GlyXY三聯(lián)體之間，由X和Y表示的每一個(gè)氨基酸可以不同，不過(guò)，其中三股螺旋形成重復(fù)序列(GlyXY)n中的至少一個(gè)Y必須是脯氨酸，其中A和D各自表示包括三股螺旋形成重復(fù)序列(GlyXY)n的肽結(jié)構(gòu)域，其中B和C各自表示不包括三股螺旋形成重復(fù)序列(GlyXY)n的非膠原序列，其中，n是2-1500的整數(shù)，其中，l，m，o和p各自選自0和1，前提是m和o中至少一個(gè)是1；并且在適于表達(dá)所述第一、第二和第三核苷酸序列的條件下培養(yǎng)所述酵母宿主細(xì)胞，從而產(chǎn)生所述羥化三股螺旋蛋白；其中，在所述培養(yǎng)步驟中所述第一、第二和第三核苷酸序列由所述酵母宿主細(xì)胞穩(wěn)定地保持并分離。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種在酵母中生產(chǎn)羥化三股螺旋蛋白的方法，包括以下步驟：將編碼P4Hα亞基的第一核苷酸序列、編碼P4Hβ亞基的第二核苷酸序列以及一個(gè)或幾個(gè)產(chǎn)物編碼核苷酸序列導(dǎo)入一種合適的酵母宿主細(xì)胞，所述產(chǎn)物編碼核苷酸序列編碼一種或幾種多肽或肽，這些多肽或肽在羥化以后生成所述羥化三股螺旋蛋白，所述第一、第二和產(chǎn)物編碼核苷酸序列的每一個(gè)均可操作地與啟動(dòng)子序列連接；在適于表達(dá)所述第一、第二和產(chǎn)物編碼核苷酸序列的條件下培養(yǎng)所述酵母宿主細(xì)胞，從而產(chǎn)生所述羥化三股螺旋蛋白；其中，該方法的特征在于導(dǎo)入所述第一、第二和產(chǎn)物編碼核苷酸序列的步驟會(huì)導(dǎo)致所述第一、第二和產(chǎn)物編碼核苷酸序列及其相應(yīng)的可操作地連接的啟動(dòng)子序列被攜帶在一個(gè)或幾個(gè)可復(fù)制的DNA分子上，該分子在所述培養(yǎng)步驟中由所述酵母宿主細(xì)胞穩(wěn)定地保持并分離。還披露了用本發(fā)明方法生產(chǎn)的轉(zhuǎn)化酵母宿主細(xì)胞和三股螺旋蛋白。 |
| 國(guó)際公布 | 1998-05-07 WO1998/018918 英 |
