公開(公告)號
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CN1843510A
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公開(公告)日
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2006.10.11
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申請(專利)號
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CN200510016689.8
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申請日期
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2005.04.06
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專利名稱
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毛形屬線蟲疫苗的制備方法及醫(yī)用用途
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主分類號
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A61K48/00(2006.01)I
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分類號
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A61K48/00(2006.01)I;A61K39/00(2006.01)I;A61P37/04(2006.01)I;A61P33/14(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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張西臣
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發(fā)明(設(shè)計)人
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張西臣;李建華;王靜敏;宮鵬濤
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地址
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130062吉林省長春市西安大路175號軍需大學(xué)
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頒證日
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機構(gòu)
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吉林長春新紀(jì)元專利代理有限責(zé)任公司
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代理人
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陳宏偉
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國省代碼
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吉林;22
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主權(quán)項
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毛形屬線蟲疫苗的制備方法,包括以下步驟: 首先獲得純凈的毛形屬線蟲,然后提取RNA,分離純化mRNA,合成cDNA第一條鏈及cDNA第二條鏈,將cDNA與ECORI適配子連接并對連接產(chǎn)物磷酸化,后分離cDNA片段,并與λZAP載體連接,進(jìn)行噬菌體包裝,測定所構(gòu)建cDNA文庫滴度及重組率后進(jìn)行文庫擴增,提取λ噬菌體DNA,并進(jìn)行cDNA文庫插入片段檢測,獲得毛形屬線蟲cDNA文庫;利用抗體或探針篩選功能性抗原基因,將篩選的功能性基因與真核基因表達(dá)載體連接,構(gòu)建重組質(zhì)粒,獲得毛形屬線蟲核酸疫苗。
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摘要
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本發(fā)明提供一種毛形屬線蟲疫苗,包括其核酸疫苗及基因工程苗的制備方法:將毛形屬線蟲RNA提取,分離純化,合成cDNA第一條鏈及第二條鏈,將cDNA與ECORI適配子連接并對連接產(chǎn)物磷酸化,后分離cDNA片段,并與λZAP載體連接,進(jìn)行噬菌體包裝,提取λ噬菌體DNA,并進(jìn)行cDNA文庫插入片段檢測,獲得毛形屬線蟲cDNA表達(dá)文庫。將篩選的功能性基因與真核基因表達(dá)載體連接,構(gòu)建重組質(zhì)粒,制備毛形屬線蟲核酸疫苗:將功能性抗原基因與原核表達(dá)載體連接,轉(zhuǎn)化DH5α菌,轉(zhuǎn)化大腸桿菌,進(jìn)行高效表達(dá),獲得毛形屬線蟲基因工程疫苗。本發(fā)明產(chǎn)品可用于腫瘤疾病,性功能低下等免疫功能低下或缺陷引起疾病的預(yù)防和治療。
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國際公布
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