| 公開(公告)號(hào) | CN1298866C |
| 公開(公告)日 | 2007.02.07 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200410103223.7 |
| 申請(qǐng)日期 | 2004.12.30 |
| 專利名稱 | 快速檢測(cè)非小細(xì)胞性肺癌表皮生長因子受體基因點(diǎn)突變方法 |
| 主分類號(hào) | C12Q1/68(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12Q1/68(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 王 進(jìn);朱 輝;秦正紅 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 王 進(jìn);朱 輝;秦正紅 |
| 地址 | 215007江蘇省蘇州市人民路48號(hào)蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)院神經(jīng)藥理研究室 |
| 頒證日 | |
| 國際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 蘇州創(chuàng)元專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 馬明渡 |
| 國省代碼 | 江蘇;32 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種快速檢測(cè)非小細(xì)胞性肺癌表皮生長因子受體基因點(diǎn)突變方法，其特征在于包括下列步驟： (1)、準(zhǔn)備DNA 以人體肺部病變組織為對(duì)象，從病變組織中獲取DNA； (2)、對(duì)DNA進(jìn)行擴(kuò)增 利用PCR擴(kuò)增方法，采用下列三組對(duì)應(yīng)外顯子DNA片段的至少一組四引物進(jìn)行擴(kuò)增： 第18外顯子點(diǎn)突變DNA片段的四引物為： 內(nèi)源有義 AACTGAATTCAAAAAGATCAAAGTGCCGG； 內(nèi)源反義 GTGCCGAACGCACCGGAACA； 外源有義 GTACATTTGTCCTTCCAAATGAGCTGGCAAGTGC； 外源反義 CACTGGAGTTTCCCAAACACTCAGTGAAACAAAG； 第21外顯子L858R點(diǎn)突變DNA片段的四引物為： 內(nèi)源有義 CAGCATGTCAAGATCACAGATTTTGGACT； 內(nèi)源反義 CGCACCCAGCAGTTTGGTCC； 外源有義 CAGAGCTTCTTCCCATGATGATCTGTCC； 外源反義 CAGGAAAATGCTGGCTGACCTAAAGCC； 第21外顯子L861Q點(diǎn)突變DNA片段的四引物為： 內(nèi)源有義 GATTTTGGGCTGGCCAAGCT； 內(nèi)源反義 TATTCTTTCTCTTCCGCACCCAACT； 外源有義 CAGAGCTTCTTCCCATGATGATCTGTCC； 外源反義 CAGGAAAATGCTGGCTGACCTAAAGCC； 具體步驟為： ①、將上述每組四引物分別與獲取的DNA、4種堿基、含鎂離子的緩沖液、耐熱性DNA聚合酶、雙重蒸餾水混合構(gòu)成單獨(dú)的反應(yīng)體系； ②、分別對(duì)各反應(yīng)體系重復(fù)進(jìn)行PCR循環(huán)，將DNA量擴(kuò)增至凝膠電泳可觀察即可； (3)、凝膠電泳 采用凝膠電泳系統(tǒng)對(duì)上述DNA擴(kuò)增后的體系做凝膠電泳； (4)、觀測(cè)結(jié)果 根據(jù)凝膠電泳對(duì)應(yīng)泳帶中所顯示的條帶數(shù)量和大小來判斷對(duì)應(yīng)外顯子位置是否發(fā)生點(diǎn)突變以及突變類型，具體判斷方法如下： ①、如果觀察到某外顯子泳帶中出現(xiàn)三條DNA條帶時(shí)，則判定有雜合子突變； ②、如果觀察到某外顯子泳帶中僅出現(xiàn)兩條DNA條帶時(shí)，則用較小條帶的大小與下列對(duì)應(yīng)組中特異性產(chǎn)物的理論值對(duì)比，根據(jù)接近程度來判斷是純合子突變或是正常特異性，三組特異性產(chǎn)物的理論值如下： A、第18外顯子點(diǎn)突變DNA片段的特異性產(chǎn)物理論值為： 正常特異性產(chǎn)物大小：198個(gè)堿基； 突變特異性產(chǎn)物大小：270個(gè)堿基； B、第21外顯子L858R點(diǎn)突變DNA片段的特異性產(chǎn)物理論值為： 正常特異性產(chǎn)物大�。�118個(gè)堿基； 突變特異性產(chǎn)物大�。�178個(gè)堿基； C、第21外顯子L861Q點(diǎn)突變DNA片段的特異性產(chǎn)物理論值為： 正常特異性產(chǎn)物大小：100個(gè)堿基； 突變特異性產(chǎn)物大�。�192個(gè)堿基。 |
| 摘要 | 一種快速檢測(cè)非小細(xì)胞性肺癌表皮生長因子受體基因點(diǎn)突變方法，其特征在于包括下列步驟：(1)準(zhǔn)備DNA；(2)利用PCR方法采用三組特殊設(shè)計(jì)的四引物對(duì)DNA進(jìn)行擴(kuò)增；(3)凝膠電泳；(4)觀測(cè)結(jié)果。本發(fā)明應(yīng)用特殊設(shè)計(jì)的引物，利用該基因檢測(cè)方法，在完成PCR反應(yīng)和凝膠電泳后，可直接觀察產(chǎn)物的數(shù)量和大小來判斷病人有無與吉非替林(Gefitinib)[商品名：易瑞沙(Iressa)]療效有關(guān)的EGRF基因點(diǎn)突變，及時(shí)指導(dǎo)臨床用藥，真正做到對(duì)癥下藥。本發(fā)明的特點(diǎn)是：1.簡單，不需測(cè)序；2.便宜，一般分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室或檢驗(yàn)室就可操作；3.靈敏度高，可以檢測(cè)到測(cè)序漏診的病例。 |
| 國際公布 |
