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您現(xiàn)在的位置: 醫(yī)學(xué)全在線 >> 藥學(xué)理論 >> 中國藥品專利文獻(xiàn) >> 正文:一種抗SARS-CoV免疫球蛋白抗體專利檢索:專利號/專利人/發(fā)明人
    

一種抗SARS-CoV免疫球蛋白抗體

公開(公告)號 CN1300172C  
公開(公告)日 2007.02.14  
申請(專利)號 CN200310113790.6  
申請日期 2003.11.25  
專利名稱 一種抗SARS-CoV免疫球蛋白抗體  
主分類號 C07K16/10(2006.01)I  
分類號 C07K16/10(2006.01)I;A61K39/395(2006.01)I;A61K9/12(2006.01)I;A61K9/08(2006.01)I;A61K9/10(2006.01)I;A61P31/14(2006.01)I;A61P11/00(2006.01)I  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 王希良;杜新安;石辛甫;張松樂;劉建源;李 巖;趙光宇;田 光;周 華  
地址 100071北京市豐臺區(qū)東大街20號  
頒證日  
國際申請  
進(jìn)入國家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 北京太兆天元知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司  
代理人 張 韜  
國省代碼 北京;11  
主權(quán)項(xiàng) 一種用于治療、預(yù)防及診斷SARS-CoV的抗SARS-CoV免疫球蛋白抗體,其特征在于該抗體是由如下制備方法制成的: 1)滅活純化的SARS-CoV加入不完全福氏佐劑乳化制備免疫原,采用皮下、肌肉、腹股溝淋巴結(jié)多點(diǎn)免疫經(jīng)檢疫符合生物制品要求的馬匹,免疫四次、間隔10天免疫一次,試血測抗體效價(jià)對流電泳1∶128、間接酶聯(lián)免疫1∶12800,測抗體中和效價(jià)細(xì)胞病變法1∶12800、空斑減數(shù)法1∶12800,并且不同的SARS-CoV標(biāo)準(zhǔn)毒株免疫馬產(chǎn)生的中和抗體均與其它SARS-CoV毒株呈現(xiàn)一致的中和抗體活性; 2)采集馬抗SARS-CoV血漿,用無熱源2倍蒸餾水稀釋加入21%飽和度硫酸銨混勻、離心棄沉淀纖維蛋白和白蛋白,上清再加入9%飽和度硫酸銨混勻離心要沉淀免疫球蛋白G,用無熱源蒸餾水恢復(fù)原體積再用30%飽和度硫酸銨混勻、離心要沉淀IgG,先加入一定量的無熱源蒸餾水、后加入無熱源0.9%氯化鈉鹽水用截留分子量為6萬的超濾器超濾除鹽、濃縮和去雜蛋白,超濾液為純化的馬抗SARS-CoV IgG; 3)純化的馬抗SARS-CoV IgG用鹽酸調(diào)PH至3.2后蛋白酶切割,再用氫化鈉調(diào)PH至7.4,加熱58℃、30min,用帆布過濾去Fc段,濾液為初步純化的馬抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)2抗體; 4)初步純化的馬抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)2抗體過苯基疏水層析柱Phenyl Sepharose 6 Fast Flow,用200mmol/L pH7.0磷酸緩沖液、1mol/L硫酸銨上柱,20mmol/L pH7.0磷酸緩沖液收集F(ab′)2抗體流出液,再用截留分子量為6萬的超濾器超濾除鹽、濃縮,得純化的馬抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)2抗體; 其中滅活純化的SARS-CoV由如下方法制得: 1)綠猴腎細(xì)胞的復(fù)蘇、培養(yǎng),取細(xì)胞種子庫凍存Vero細(xì)胞株,用DMEM培養(yǎng)基并加入10%小牛血清培養(yǎng),提供培養(yǎng)SARS-CoV的Vero細(xì)胞; 2)SARS冠狀病毒滴定,對培養(yǎng)的Vero細(xì)胞加入經(jīng)鑒定凍存的SARS-CoV,擴(kuò)增培養(yǎng)SARS-CoV,采用組織培養(yǎng)測定SARS-CoV病毒的毒力,其半數(shù)感染量為106-108,對滴定的SARS-CoV分裝凍存; 3)用長滿單層的Vero細(xì)胞加入滴定的SARS-CoV,用無血清DMEM培養(yǎng)SARS-CoV,生產(chǎn)SARS-CoV; 4)Vero細(xì)胞完全病變后收集SARS-CoV培養(yǎng)液,反復(fù)凍融三次,-37℃冰凍或不凍融,收集SARS-CoV細(xì)胞培養(yǎng)液; 5)向SARS-CoV培養(yǎng)液加入1/2000-1/8000的β-丙內(nèi)酯,4℃過夜、37℃2h滅活SARS-CoV,取滅活的SARS-CoV培養(yǎng)液在Vero細(xì)胞上連傳三代,檢測SARS-CoV滅活效果; 6)滅活的SARS-CoV培養(yǎng)液,4℃、離心12000rpm 30min,棄沉淀雜蛋白,上清為SARS-CoV液; 7)用截留分子量為30萬的超濾柱超濾SARS-CoV液,濃縮和去雜蛋白,濾液為粗制滅活的SARS-CoV; 8)對粗制滅活SARS-CoV上Sepharose 4 Fast Flow分子篩柱,開始緩沖液是0.1MPBS PH7.0緩沖液,用100mM PBS PH7.0洗脫,收集SARS-CoV,合并濃縮收集初步純化的SARS-CoV; 9)對初步純化的SARS-CoV液上DE52陰離子柱層析,用100mM PB,PH7.2液平衡并將病毒吸附在柱上、用100mM PB,PH7.2,0.35M NaCl洗脫,收集SARS-CoV峰,合并濃縮收集純化的SARS-CoV; 10)純化滅活的SARS-CoV分裝放-70℃保存。  
摘要 本發(fā)明涉及一種用于治療、預(yù)防及診斷SARS-CoV的抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)2抗體,特征在于該抗體為馬抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab′)2抗體,同時(shí)本發(fā)明公開該抗體的制備方法。本發(fā)明抗體能特異消滅SARS-CoV,對非典型炎的治療和預(yù)防有很好的效果。  
國際公布  
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