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荷葉—黃酮類物質(zhì)含量的測定方法—HPLC-UV

  
方法名稱:
  荷葉—黃酮類物質(zhì)含量的測定—HPLC-UV
應(yīng)用范圍:
  用于荷葉中黃酮類物質(zhì)含量的測定
方法原理:
 本品經(jīng)粉碎、提取、脫脂、分析,一部分再經(jīng)脫鞣質(zhì),用乙醚直接提取,經(jīng)高效液相色譜法分離,在370nm測定,按外標(biāo)法計(jì)算測定游離黃酮甙元含量。
儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)條件:
 

儀器設(shè)備  Waters 515高效液相色譜儀;Waters2487檢測器。

色譜條件:色譜柱:Nova-pak C18柱 ;檢測波長:370nm; 流動(dòng)相: 甲醇∶水( 50∶50 ,V/V) ;流速:0.7ml/min ;柱溫:室溫.
試樣制備:
 

對照品溶液的制備  準(zhǔn)確吸取2.0mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于25mL容量瓶中,甲醇定容至刻度,搖勻, 濃度為8μg/mL。

供試品溶液的制備   選無損壞干荷葉、撕碎,在粉碎機(jī)中粉碎至60目,共需100g荷葉粉末將100g荷葉粉末置于錐形瓶中,加入約600mL95%乙醇(V總≈2V荷葉粉末),浸泡過夜, 將浸泡液在溫度為60℃左右的水浴中回流提2h,冷卻,倒出乙醇提取液,抽濾除渣,得墨綠色提取液780mL. 將墨綠色提取液分多次在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮轉(zhuǎn)移分液漏斗,加入100mL的蒸餾水,再加入60mL沸程為30~60℃的石油醚,充分搖勻后靜置,分去石油醚層,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮(水浴溫度55 ℃,轉(zhuǎn)速50r/ min),濃縮至少量時(shí),往梨形瓶中加入少量無水乙醇,繼續(xù)濃縮,直至蒸干,最后得一層橙黃色稠狀的粗提物,往粗提取中加入97.5%的乙醇溶解,過濾,取濾液加入乙醇放入分液漏斗中,再加入乙醚萃取,分離乙醚層,蒸干,用甲醇溶解,備用。
操作步驟:
  分別吸取兩種對照品溶液和兩種供試品溶液各10μL,注入液相色譜儀,按擬定色譜條件測定,以外標(biāo)法計(jì)算含量。
附件:
  點(diǎn)擊下載 (解壓密碼:f1411.cn)
備注:
 
參考文獻(xiàn):
  洪慶慈,汪海峰.荷葉中黃酮類物質(zhì)含量的測定.鄭州工程學(xué)院學(xué)報(bào).2001.22.(2):50~54
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