方法名稱: |
板藍(lán)根--氨基酸含量測(cè)定-- HPLC法 |
應(yīng)用范圍: |
測(cè)定板藍(lán)根中氨基酸含量 |
方法原理: |
樣品加40%乙醇水溶液超聲提取,衍生化后經(jīng)液相色譜儀分離,以正亮氨酸為內(nèi)標(biāo),在360nm 處測(cè)定峰面積,外標(biāo)法測(cè)定氨基酸含量。 |
儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)條件: |
儀器設(shè)備 大連依利特分析儀器有限公司P200 Ⅱ泵、UV200 型紫外檢測(cè)器、Echrom 98 色譜數(shù)據(jù)處理工作站。 |
試樣制備: |
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別準(zhǔn)確稱取精氨酸、脯氨酸和谷氨酸對(duì)照品約10 mg,置于10mL量瓶中,用40%乙醇水溶液溶解并稀釋至刻度, 搖勻,即得精氨酸、脯氨酸和谷氨酸對(duì)照品溶液。準(zhǔn)確稱取精氨酸、脯氨酸和谷氨酸對(duì)照品31.35,33.02 和32.67mg,置于25mL量瓶中,用40%乙醇水溶液溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得對(duì)照品混合溶液。準(zhǔn)確吸取對(duì)照品混合溶液0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5,4.0mL,置于10 mL量瓶中,加衍生緩沖液1.0 mL,搖勻,再加衍生溶液1.0 mL,搖勻,避光,于60℃水浴保溫1h,放冷,加平衡溶液至刻度,放置15min后分別進(jìn)樣10μL,測(cè)得峰面積,以峰面積對(duì)進(jìn)樣量做線性回歸,即得。 衍生緩沖溶液的制備 稱取NaHCO3 平衡溶解的制備 稱取KH2PO4 |
操作步驟: |
依上述方法制備供試品溶液,取10μL進(jìn)樣,依法測(cè)定,外標(biāo)法計(jì)算含量。 |
附件: |
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備注: |
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參考文獻(xiàn): |
萬(wàn)紹暉,楊浩,耿秀梅.柱前衍生化反相高效液相色譜法測(cè)定板藍(lán)根中的氨基酸.色譜.2005,23(4):408-410 |