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(electrochemiluminescence)試劑聯(lián)吡啶釕配合物Ru(bpy)2+3發(fā)生的電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，建立了對其進(jìn)行含量測定的新方法。
毛細(xì)管電泳(capillary electrophoresis)已成為一種重要的分離技術(shù)。在分析科學(xué)尤其是生命科學(xué)及臨床醫(yī)學(xué)中起著很重要的作用[6]。在電化學(xué)發(fā)光體系中，電化學(xué)發(fā)光試劑聯(lián)吡啶釕配合物Ru(bpy)2+3已被成功地用于免疫分析、DNA分析、藥物分析和機(jī)理的研究等諸多領(lǐng)域[78]。把毛細(xì)管電泳與電化學(xué)發(fā)光分析法有機(jī)結(jié)合起來，可以將毛細(xì)管電泳的高分離能力與電化學(xué)發(fā)光高靈敏度檢測優(yōu)點相結(jié)合[911]。CEECL聯(lián)用同時測定復(fù)方磷酸可待因口服溶液所含多種混合物中三種藥物含量的方法未見報道。本文建立的新方法對于科學(xué)準(zhǔn)確地控制和管理麻醉及精神藥品起到了很好的作用。
1 材料與方法
1.1 儀器與試劑
MPIA型毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光檢測器(西安瑞邁電子科技有限公司)。pHs2C型酸度計(上海華僑儀器廠)。KQ218超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。毛細(xì)管長50cm、內(nèi)徑為25μm (河北永年光導(dǎo)纖維廠)。聯(lián)吡啶釕(Sigma公司)儲備液0.1mol/L：取聯(lián)吡啶釕約2.0g，精密稱定至1.8715g，用二次蒸餾水稀釋并定容至25mL，即得100mmol/L的儲備液，使用前逐級稀釋至所需濃度。用Na2HPO4和NaH2PO4(西安化學(xué)試劑廠)配制一系列pH值的磷酸鹽緩沖液。實驗中所用試劑均為分析純，水為二次蒸餾水。實驗中所有進(jìn)入毛細(xì)管的溶液須用0.22μm醋酸纖維素膜過濾。
磷酸可待因和鹽酸麻黃堿對照品均由中國藥品生物制品檢定所提供，純度分別為99.8%和99.7%。馬來酸溴苯那敏原料藥執(zhí)行企業(yè)內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，由沈陽新地藥業(yè)有限公司提供，含量在98.5%以上(國藥準(zhǔn)字H20052113)。復(fù)方磷酸可待因口服溶液購自香港澳美制藥廠。批號：0706302，0803302，0804302;規(guī)格：每5mL樣品中含有磷酸可待因4.5mg，馬來酸溴苯那敏2.0mg，鹽酸麻黃堿5.0mg和愈創(chuàng)木酚甘油醚。
1.2 實驗方法
混合對照品溶液的配制：準(zhǔn)確稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的磷酸可待因、鹽酸麻黃堿、馬來酸溴苯那敏對照品分別約為45，50，20mg，置50mL量瓶中，用二次蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液1mL，置10mL量瓶中，用二次蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻，得混合對照品溶液。用0.22μm醋酸纖維素膜過濾,取過濾液進(jìn)行測定。用前逐級稀釋至所需濃度。
樣品溶液的配制：取復(fù)方磷酸可待因口服溶液1mL，置10mL容量瓶中，用二次蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻，再用0.22μm醋酸纖維素膜過濾,取過濾液進(jìn)行測定。
毛細(xì)管的預(yù)處理與檢測池的安裝：將未涂層的新毛細(xì)管使用前依次用1mol/L NaOH溶液在60℃沖洗30min，使毛細(xì)管內(nèi)壁生成硅醇基，再依次用0.1mol/L NaOH溶液、二次蒸餾水、運行緩沖液各沖洗10min。每次使用前毛細(xì)管分別以NaOH溶液、二次蒸餾水、磷酸鹽緩沖液各沖洗5min。兩次進(jìn)樣中間可僅用緩沖液沖洗。
2 結(jié)果
2.1 分離條件的優(yōu)化
分離高壓對ECL光強(qiáng)的影響： 當(dāng)毛細(xì)管兩端所加分離高壓在3～19kV范圍內(nèi)變化時，發(fā)現(xiàn)當(dāng)其高于15kV時，基線噪音變得明顯，可能是由于較大的分離電壓使毛細(xì)管內(nèi)焦耳熱效應(yīng)增加，峰形變差。另一方面，參照進(jìn)樣體積公式[12]：Vi=Ei ×ti ×Vcapillary/Es×tm，Ei表示進(jìn)樣電壓，Es表示分離電壓，ti表示進(jìn)樣時間，tm表示分析物的遷移時間，Vcapillary表示毛細(xì)管的體積�？煽闯鲭S著分離高壓的增大，進(jìn)樣量的減少可能導(dǎo)致發(fā)光效率的降低。實驗中采用15kV作為分離電壓醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站f1411.cn。
