�。ㄈ�)補體參與抗原抗體反應
這一類反應主要包括溶血反應（hemolytic assay)、補體介導的細胞毒試驗（complement mediated cytotoxicuty test)及補體結合試驗（complement fixation test)。
1．溶血反應 抗體與紅細胞表面抗原相遇，形成紅細胞-抗體復合物即可使加入反應中的補體活化，導致紅細胞溶解，此方法可用于紅細胞的各種抗原或相應抗體的檢測，此法比凝集反應敏感。溶血反應也是用于抗體分泌細胞即空斑形成細胞（PFC)檢測的原理。
2．補體介導的細胞毒試驗各種有核細胞與針對其表面抗原的抗體相遇，所形成的免疫復合物能活化反應中的補體，引起細胞膜穿孔，在一定時間內(nèi)，細胞仍能維持一定的形態(tài)不破碎，加入水溶性染如伊紅Y（eosin Y)或臺盼藍（trypan blue)后，染料即可進入被活化補體穿孔的細胞，不帶相應抗原細胞膜保持完整的活細胞不著色。此方法可用于帶各種抗原的細胞的檢測，如進行細胞MHC抗原的鑒定，和進行淋巴細胞中T細胞總數(shù)或其亞類的計數(shù)。在一些免疫學實驗中也可用這種方法，根據(jù)需要特異地消除帶某種抗原的細胞。
3．補體結合試驗當抗原（可溶性或顆粒性)與相應抗體結合，由于濃度低不出現(xiàn)可見反應時，應用補體結合試驗可檢出此抗原抗體反應，它比凝集反應或沉淀反應靈敏度高。本法包括兩個抗原抗體系統(tǒng)。一為檢測系統(tǒng)由待檢樣品與已知抗原（或抗體)組成；另一為指示系統(tǒng)，由綿羊紅細胞（SRBC)和抗SRBC組成。另加入作為補體的新鮮豚鼠血清。試驗時試管中先加入檢測系統(tǒng)和補體，混合經(jīng)37℃30分鐘使抗原、抗體、補體形成復合物，再加入指示系統(tǒng)，如出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，說明檢測系統(tǒng)中沒有相對應的抗原抗體，補體是游離的指示系統(tǒng)的SRBC和抗體結合而出現(xiàn)溶血，即為反應陰性。如不出現(xiàn)溶血，表明檢測系統(tǒng)中有抗原抗體復合物并結合補體，則指示系統(tǒng)無多余的補體作用而沒有溶血現(xiàn)象，即為陽性。
在敏感的抗原、抗體檢測方法（如酶標方法)出現(xiàn)之前補體結合試驗曾廣泛用于檢測各種細菌、病毒或螺旋體（如梅毒)的抗原或抗體，由于本試驗影響因素多，結果不穩(wěn)定現(xiàn)已被新檢測方法所代替。
四、用標記抗體或抗原進行的抗原、抗體反應
用熒光素、同位素或酶標記抗體或抗原，用于抗原或抗體檢測是目前廣泛應用的敏感、可靠的方法。上述三種常用的標記物與抗原或抗體化學連接之后不改變后者的免疫特性。本方法可用于定性、定量或定位檢測。
1．免疫熒光技術 免疫熒光技術（immunofluorescence techni)是用化學方法使熒光素標記的抗體（或抗原)與組織或細胞中的相應抗原（或抗體)結合，進行定性定位檢查抗原或抗體的方法。
�。�1)直接熒光法：把熒光抗體加到待檢的細胞懸液，細胞涂片或組織切片上進行染色，經(jīng)抗原抗體反應后，洗去未結合的熒光抗體，將待檢標本在熒光顯微鏡下觀察，有熒光的部位即有相應抗原存在，此法可用于病毒感染細胞、帶某種特異抗原的細胞（如T細胞和B細胞)或病原菌的檢查，也可用于組織中沉著的免疫復合物的檢查。本法的缺點是檢查多種抗原，就需分別制備相應的多種標記抗體。
�。�2)間接熒光法：可克服直接法需制備多種熒光抗體的復雜操作。將組織或細胞上的抗原直接與相應抗體（不標記熒光)結合，此為第一抗體，再把能與第一抗體特異結合的熒光標記的抗免疫球蛋白抗體加入，此為熒光標記的第二抗體，觀察結果與直接法相同。間接法比直接法敏感性高，如果用于檢查抗原的第一抗體是人或動物的只需制備一種抗人或動物的免疫球蛋白熒光抗體（圖20-5)。
圖20-5 免疫熒光直接法及間接法原理示意圖
免疫熒光技術在傳染病診斷上有廣泛的用途，如在細菌、病毒、螺旋體感染的疾病，檢查抗原或抗體，如查出IgM抗體，可做為近期接觸抗原的標志，所以使用熒光標記抗IgM可診斷近期感染。除微生物學方面的應用外，還可利用單克隆抗體鑒定淋巴細胞的亞類。使用流式細胞儀(fluorescene-activated cell sorting,FACS)，能自動檢測細胞的大小、熒光強度。針對細胞表面不同抗原，可以使用兩種不同的熒光染料，如用異硫氰熒光素（FITC)發(fā)黃綠熒光，用羅丹明（TMRITC)發(fā)紅色熒光。由于熒光顏色不同標記兩種不同的抗體，對同一細胞進行雙標記染色。對淋巴細胞亞類鑒定起著巨大推動作用。應用間接熒光法也用于自身免疫病的抗核抗體檢查。
2．放射免疫分析法 放射免疫分析法（radioimmunoassay RIA)應用競爭性結合的原理，應作放射性同素標記抗原（或抗體)與相應抗體（或抗原)結合，通過測定抗原抗體結合物的放射活性判斷結果，本方法可進行超微量分析，敏感性高，可用于測定抗原、抗體、抗原抗體復合物。本法常用的同位素有125Ⅰ和131Ⅰ。
放射免疫分析常用的有液相法和固相法兩種：
�。�1)液相法：將待檢標本（例如含胰島素抗原)與定時的同位素標記的胰島素（抗原)和定時的抗胰島素抗體混合，經(jīng)一定作用時間后，分離收集抗原抗體復合物及游離的抗原，測定這兩部分的放射活性，計算結合率。在反應系統(tǒng)中，待檢標本的胰島素抗原與同位素標記的胰島素競爭奪戰(zhàn) 性與胰島素抗體結合。非標記的抗原越多，標記抗原與抗體形成的復合物越少。非標記抗原含量與標記抗原抗體復合物的量呈一定的函數(shù)關系。預先用標準的非標記抗原作成標準曲線后，即可查出待檢標本中胰島素的含量（圖20-6)。
圖20-6 液相放射免疫分析法原理及標準曲線
�。�2)固相法：將抗原或抗體吸附到固相載體表面，然后加待檢標本，最后加標記抗體。測定固相載體的放射活性，常用的固相載體有溴化氰（CNBr)海豹化的紙片或聚苯乙烯小管（圖20-7)。
圖20-7 固相放射免疫分析法原理
放射免疫分析法應用范圍廣泛，包括多種激素（胰島素、生長激素、甲狀腺素等)維生素、藥物、IgE等。
3．酶聯(lián)免疫分析法 酶聯(lián)免疫分析法（enzyme immunoassay,EIA)是當前應用最廣泛的免疫檢測方法。本法將抗原抗體反應的特異性與酶對底物高效催化作用結合起來，根據(jù)酶作用底物后顯色，以顏色變化判斷試驗結果，可經(jīng)酶標測定儀作定量分析，敏感度可達ng水平。常用于標記的酶有辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase)、堿性磷酶（alkaline phosphatase)等。它們與抗體結合不影響抗體活性。這些酶具有一定的穩(wěn)定性，制成酶標抗體可保存較長時間。目前常用的方法有酶標免疫組化法和酶聯(lián)免疫吸附法。前者測定細胞表面抗原或組織內(nèi)的抗原；后者主要測定可溶性抗原或抗體。本法既沒有放射性污染又不需昂貴的測試儀器，所以較放射免疫分析法更易推廣。
圖20-8 生物素－酶標親合素系統(tǒng)反應示意圖
�。�1)酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA):是與上述固相RIA相似的原理，將抗原或抗體吸附在固相載體表面。使抗原抗體反應在固相載體表面進行政區(qū)�？捎瞄g接法、雙抗體夾心法或競爭法測定抗原或抗體。
