（二)染色體G顯帶技術(shù)
1．原理 染色體的化學(xué)成份是核酸和蛋白質(zhì)兩部分。核酸以DNA為主，蛋白質(zhì)有組蛋白和非組蛋白兩種。因此染色體經(jīng)蛋白水解酶類物質(zhì)處理后，蛋白質(zhì)已被水解而使DNA分子中堿基暴露，由于堿基中G/C和A/T組合的比例不同，對(duì)染料結(jié)合的程度不一，如這一段A/T堿基的成份多，則Giemsa染料易與它結(jié)合成深染；另一段G/C堿基的成份多，則Giemsa染料不易與其結(jié)合，結(jié)果成淡染，由于整條染色體上A/T和G/C的分布不勻，這樣在染色體上呈現(xiàn)出深淺不一的條紋或者稱帶紋，該技術(shù)用Giemsa染色，故其帶型稱為G帶。
2．操作過程
�。�1)按常規(guī)染色體技術(shù)制片。
�。�2)制好的染色體玻片，在80℃烘箱中，烘烤2h，置于室溫。
（3)4℃冰箱PBS液5min。
（4)4℃冰箱PBS緩沖液含胰蛋白酶終濃度0.025%，消化10min。
�。�5)蒸餾水洗凈胰酶。
�。�6)Giemsa染色20min。
�。�7)蒸餾水洗凈染色液，晾干鏡檢。
4℃低溫胰酶處理片子，其優(yōu)點(diǎn)是：時(shí)間較長，易掌握。配制1次試劑可用1～2個(gè)月。
�。ㄈ�)高分辨染色體G帶技術(shù)
1．原理常規(guī)的G帶顯帶技術(shù)，在人類染色體中僅觀察到320～450條帶紋，對(duì)于一些染色體細(xì)微結(jié)構(gòu)異常的識(shí)別是不夠的。
氨甲碟呤抑制二氫葉酸還原酶，阻止葉酸轉(zhuǎn)變?yōu)樗臍淙~酸，從而干擾了脫氧胸腺嘧啶核苷酸的合成，阻止了DNA的復(fù)制，使細(xì)胞被阻止在S期內(nèi)。胸腺嘧啶核苷解除氨甲喋呤的作用，讓被阻滯的細(xì)胞同時(shí)開始進(jìn)行DNA復(fù)制，進(jìn)而同步分裂；放線菌素D可增加染色體的長度，能顯示更多的亞帶。放線菌素D與核酸相互作用：①插入脫氧鳥嘌呤核苷酸和脫氧胞啶核苷酸之間，使DNA變長；②能與染色體縮短有關(guān)的特殊蛋白和DNA結(jié)合，因此，抑制了染色體正常的收縮過程。秋水仙胺抑制紡垂絲的形成，可以得到較多的晚前期、前中期、早中期的分裂相。這樣染色體帶紋可增加到500和850條，甚至可達(dá)1200～2000條之多。這一步對(duì)于研究較細(xì)小的染色體缺陷的基因定位，具有很大的意義。
2．材料和方法
�。�1)4ml培養(yǎng)液（為從日本進(jìn)口的RPMi 1640或從美國進(jìn)口的F10液)雖自制的小牛血清1ml。每ml加青、鏈霉素各100單位，pH=7.2。
�。�2)每瓶培養(yǎng)液內(nèi)，另加自制的PHA或重慶產(chǎn)的PHA2.5mg。
�。�3)取外周血2ml，分別裝入含培養(yǎng)液的4個(gè)培養(yǎng)瓶內(nèi)。
�。�4)37℃孵育箱內(nèi)培養(yǎng)72h。
（5)加入氨甲喋呤，最終濃度10-7mol/L，繼續(xù)培養(yǎng)17h。
（6)用不含血清的培養(yǎng)液沖洗兩次后，將上清液吸出，再加入含胸腺嘧啶核苷（最終濃度為10-5mol/L)的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)3h。
（7)再加入放線菌素D，最終濃度為3μg/ml，培養(yǎng)2h。
�。�8)加秋水仙胺，最終濃度為0.03μg/ml，培養(yǎng)2h。
�。�9)按常規(guī)染色體技術(shù)制片。
�。�10)按一般常用的G帶顯帶技術(shù)，顯示帶紋。
3．注意事項(xiàng)
�。�1)高分辨染色體，重疊多，應(yīng)增加固定次數(shù)和固定時(shí)間，可置于4℃冰箱存放24h后制片，用高距離滴片，以使染色體分散開。
�。�2)細(xì)胞培養(yǎng)液同步化后，如果用5-溴-2脫氧尿核苷（5-bromodeoxyuridine,BrdU)，則需加黑物包裝進(jìn)行暗培養(yǎng)。
