原位雜交組織化學(xué)常用試劑及處理

　　二、關(guān)于探針的標(biāo)記

　�。ㄒ�)cRNA探針的同位素標(biāo)記

　　1．標(biāo)記液（轉(zhuǎn)錄標(biāo)記)

　　2．轉(zhuǎn)錄緩沖液

　　※：用地高辛或生物素標(biāo)記時(shí)，用UTP替代。

　　3．標(biāo)記終止液

　　4．標(biāo)記探針?biāo)�解�?/P>

　　先用dH₂O懸浮探針，再加入后兩種試劑，輕輕振搖混合，于60℃條件下反應(yīng)。

　　5．探針?biāo)�解時(shí)間

　　注：L_O－探針初始長度（kb)

　　L_f－探針的終長度（kb)

　　K－0.11kb/min

　　6．探針?biāo)�解終止液

　　每次加入充分混合，臨用前配。

　　7．探針沉淀液

　　每次加入，充分混合，新鮮配制。

　�。ǘ�)寡聚核苷酸3’端標(biāo)記（cRNA探針)

　　1．標(biāo)記反應(yīng)液

　　2．終止液：0.2mol/L EDTA

　　3.探針沉淀液

　�。ㄈ�)cRNA探針非同位素標(biāo)記（地高辛及生物素)

　　1．標(biāo)記液

　　△：生物素標(biāo)記時(shí)為10mmol/L的生物素-11-UTP

　　※：為檢測(cè)標(biāo)記率而加。

　　2．轉(zhuǎn)錄標(biāo)記終止液

　　（1)0.2mol/L EDTA：用于地高辛標(biāo)記法

　�。�2)生物素標(biāo)記終止液：

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