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細(xì)胞色素C活力測(cè)定法,藥物分析考試西藥分析 | |||||
來(lái)源:醫(yī)學(xué)全在線 更新:2007-5-16 考研論壇 | |||||
試劑 (1) 磷酸鹽緩沖液(0.2mol/L) 取磷酸氫二鈉71.64g,加水使溶解成1000ml,作為甲液。另取磷酸二氫鈉27.60g,加水使溶解成1000ml,作為乙液。取甲液81ml與乙液19ml,混勻,調(diào)節(jié)pH值至7.3。 (2) 磷酸鹽緩沖液(0.1mol/L) 取磷酸鹽緩沖液(0.2mol/L)500ml,加水稀釋成1000ml,調(diào)節(jié)pH值至7.3。 (3) 磷酸鹽緩沖液(0.02mol/L) 取磷酸鹽緩沖液 (0.2mol/L) 100ml,加水稀釋成1000ml,調(diào)節(jié)pH值至7.3。 (4) 琥珀酸鹽溶液 取琥珀酸與氫氧化鉀各4.72g,加水使溶解成100ml,調(diào)節(jié)pH值至7.3。 (5) 氰化鉀溶液 取氰化鉀0.65g,加水使溶解成100ml后,用稀硫酸調(diào)節(jié)pH值至7.3。 (6) 去細(xì)胞色素C的心懸浮液醫(yī).學(xué).全.在.線www.med126.com 取新鮮豬(牛)心2只,除去脂肪與結(jié)締組織,切成條,用絞肉機(jī)絞碎,置紗布兜中,用常水沖洗約2小時(shí)(經(jīng)常攪動(dòng),擠出血色素),擠干,用水洗數(shù)次,擠干,置磷酸鹽緩沖液(0.1mol/L)中浸泡約1小時(shí),擠干,重復(fù)浸泡1次,用水洗數(shù)次,擠干,置組織搗碎機(jī)內(nèi),加磷酸鹽緩沖液(0.02mol/L)適量恰使豬(牛)心浸沒(méi),搗成勻漿,離心10分鐘(普通離心機(jī)),取上層混懸液,加冰塊少量,迅速用稀醋酸調(diào)節(jié)pH值至約5.5,立即離心15分鐘,取沉淀,加等體積的磷酸鹽緩沖液(0.1mol/L),用玻璃勻漿器磨勻后,貯存于冰箱中;臨用時(shí)取1.0ml,加磷酸鹽緩沖液(0.1mol/L)稀釋成10ml. 供試品溶液的制備 取供試品,加水制成每1ml中含細(xì)胞色素C約3mg的溶液。 測(cè)定法 取磷酸鹽緩沖液(0.2mol/L)5ml、 琥珀酸鹽溶液1.0ml與供試品溶液0.5ml(如系還原型制劑,應(yīng)加入0.01mol/L鐵氰化鉀溶液0.05ml),置25ml具塞比色管中,加去細(xì)胞色素C的心懸浮液0.5ml與氰化鉀溶液1.0ml,加水稀釋至10ml,搖勻,以同樣的試劑作空白,照分光光度法(附錄Ⅳ A),在550nm的波長(zhǎng)處附近,間隔0.5nm找出最大吸收波長(zhǎng),并測(cè)定吸收度,直至吸收度不再增大為止,作為酶還原吸收度;然后各加連二亞硫酸鈉約5mg,搖勻,放置約10分鐘,在上述同一波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度,直至吸收度不再增大為止,作為化學(xué)還原吸收度;按下式計(jì)算。 酶還原吸收度 細(xì)胞色素C活力=───────────×100% 化學(xué)還原吸收度 |
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文章錄入:凌云 責(zé)任編輯:凌云 | |||||
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