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執(zhí)業(yè)藥師:體內(nèi)藥物分析中的直接進(jìn)樣技術(shù) | |||||
來源:醫(yī)學(xué)全在線 更新:2007-5-15 考研論壇 | |||||
在用HPLC進(jìn)行體液中藥物分析或生物樣品分析時(shí)常需進(jìn)行預(yù)處理,因?yàn)?1.為了使樣品的物理狀態(tài)適用于色譜柱.2.使帶測組分得到富集以達(dá)到儀器的靈敏度. 當(dāng)組分樣品同時(shí)含有大量蛋白質(zhì)或其他內(nèi)源性雜支時(shí),預(yù)處理的方法比較復(fù)雜繁瑣.因此近年來在直接進(jìn)樣方面有了很大的發(fā)展,目的就是為了解決這類問題.主要集中于直接進(jìn)樣用固定相,柱切換技術(shù)及膠束色譜等方面. 下面簡單的介紹這三方面: 1. 直接進(jìn)樣用固定相 直接進(jìn)樣用固定相有如下特點(diǎn). (1)在一定條件下固定相對蛋白質(zhì)不保留或幾近不保留,而被測組分能夠被保留在柱上進(jìn)行分離. (2)當(dāng)被測組分的K落在合理的范圍內(nèi)時(shí)于固定相匹配的流動相中有機(jī)改性劑的溶度保持在低水平上,即固定相對被測組分的保留不能太強(qiáng),避免由于流動相中有機(jī)改性劑的比例增加使蛋白質(zhì)沉積在柱上.固定相具有以上的特征主要是利用小孔徑硅膠對蛋白質(zhì)的排阻性質(zhì)和對硅膠基體表面進(jìn)行適當(dāng)?shù)母男詠韺?shí)現(xiàn)的.例如當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)的直徑大于硅膠孔徑時(shí),蛋白質(zhì)分子就完全被排阻于填料孔徑之外.因此為了使蛋白質(zhì)不保留或幾近不保留需對硅膠進(jìn)行改性. 醫(yī).學(xué).全.在.線www.med126.com 改性后的硅膠可以分為兩類(1)硅膠內(nèi)外具有不同的鍵合基團(tuán)內(nèi)表面親水,不吸附蛋白質(zhì),內(nèi)表面疏水保留藥物.(2)硅膠的內(nèi)外表面具有相同的組成,都鍵合有親水疏水的基團(tuán),其作用是首先引入親水基團(tuán)調(diào)節(jié)外表面的疏水性,使蛋白質(zhì)不沉積在外表面,但同時(shí)存在疏水基,外表面仍吸附部分蛋白質(zhì).但當(dāng)飽和時(shí)就不在吸附了,其次被測組分進(jìn)入填料的空隙中,于混合基團(tuán)的疏水基作用,保留在固定相中. 目前主要應(yīng)用的直接分析用固定相有以下幾種: (a) 屏蔽疏水固定相(SHP) SHP的硅膠上鍵合有親水性聚氧化乙烯的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),內(nèi)有疏水性的苯基。小分子可以通過網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),大分子則被屏蔽在柱填料間隙處被洗脫。此固定相具有穩(wěn)定性好重現(xiàn)性好的特點(diǎn),經(jīng)過1000次含有甲氧芐啶的血清直接進(jìn)樣,色譜柱性能無較太大改變。 (b) 混合功能基固定相(MEP) 是指在多孔硅膠表面上同時(shí)鍵合有疏水和清水兩種基團(tuán)的固定相。特點(diǎn)是對于親水性和疏水性的藥物均適用?捎糜谘逯袠O性較大的和非極性的藥物直接進(jìn)樣分析,用這種固定相已成功的分析了血樣中的苯巴比妥、苯妥英、卡馬西平等抗癲癇藥的分析。 |
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文章錄入:凌云 責(zé)任編輯:凌云 | |||||
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