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紫外可見分光光度法
一、基本原理紫外--可見分光光度法：是根據(jù)物質分子對波長為200-760nm這一范圍的電磁波的吸收特性所建立起來的一種定性、定量和結構分析方法。操作簡單、準確度高、重現(xiàn)性好。波長長(頻率小)的光線能量小，波長短(頻率大)的光線能量大。 100nm 200nm 400nm 800nm 400um 1m
通指
X-射線 紫外區(qū) 可見區(qū) 紅外區(qū) 微波區(qū) 無線電波區(qū)
Beer-lambert定律： A=E l c A--吸收度 E-吸收系數(shù) l ---液層厚度 c---溶液濃度吸收度濃度與厚度的關系。是吸收光度法的基本定律，重要前提是單色光。
摩爾吸收系數(shù)：指在一定波長下，溶液濃度為1mol/L , 厚度為1cm時的吸收度，用 表示。百分吸收系數(shù)：指在一定波長下，溶液濃度為1%(W/V) , 厚度為1cm時的吸收度，用 表示。
影響B(tài)eer定律因素：化學因素，光學因素
二、紫外--可見分光光度計： 主要部件：
1、 光源：要求光譜的光源，
2、 氫燈和鎢燈(350nm)
3、 單色器：進口狹縫、準直鏡、色散元件(棱鏡和光柵)、聚焦透鏡和出口狹縫組成。
4、 吸收池：用光學玻璃制成的吸收池，
5、 只能用于可見光區(qū)。用熔融石英(氧化硅)，
6、 可見紫外光區(qū)。醫(yī).學.全.在.線網(wǎng)站f1411.cn
7、 檢測器：光電池：(硒光電池：用于可見光；硅光電池：紫外可見光) 內阻小，光電管：內阻高，電流易放大 。
8、 易疲勞。
9、 訊號處理和顯示器
三、定性與定量方法：
(一)、定性鑒別：是多數(shù)有機化合物具有吸收光譜特征。一般用對比法。
1、對比吸收光譜特征數(shù)據(jù)
2、對比吸收度(或吸收系數(shù))比值
3、對比吸收光譜的一致性
(二)、純度檢查：雜質檢查與雜質限量檢測
(三)、含量測定：
1、吸收系數(shù)法
2、標準曲線法
3、對照法
熒光分析法熒光分析法：利用熒光的物理特性而進行定性與定量測定的方法。熒光法比紫外可見靈敏。熒光光度計：激發(fā)光源、樣品池、檢測器、濾光片和單色器。醫(yī)學全在線f1411.cn
紅外分光光度計紅外線：波長大于0.76um，小于500um的電磁波。 Hooke定律來描述分子的伸縮振動。當分子的振動頻率與入射的紅外頻率相同時，分子對紅外產(chǎn)生吸收。伸縮振動和彎曲振動�；l峰：分子吸收一定頻率的紅外線，振動能級由基態(tài)(V=0)躍遷至第一激發(fā)態(tài)時產(chǎn)生的吸收峰。倍頻峰：振動能級由基態(tài)躍至第二、三激發(fā)態(tài)。統(tǒng)稱泛頻峰。吸收峰：用于鑒別官能團存在的吸收峰稱特征吸收峰。指紋區(qū)：1250-400cm (8.0-25um)的低頻區(qū)稱為指紋區(qū)。紅外分光光度計主要部件：光源、吸收池、單色器(棱鏡和光柵)和檢測器(真空熱電偶)及記錄裝置。
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