豬鏈球菌自家滅活苗的制備及應用
感謝大夫為我快速解答——該如何治療和防治
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豬鏈球菌病主要是由C、D、E、L群鏈球菌引起的豬的一種傳染病，根據(jù)感染鏈球菌類群的不同，病豬臨床癥狀主要表現(xiàn)為共濟失調、圓圈運動等
腦神經炎癥狀及前后肢關節(jié)腫大、跛行;解剖病變主要表現(xiàn)為支氣管
肺炎、腦膜腦炎、
敗血癥、關節(jié)炎、心內膜炎、淋巴結炎、化膿性皮膚膿腫等�！ ≡诮�20年來，隨著規(guī)�；B(yǎng)豬的不斷發(fā)展，豬鏈球菌病曾在養(yǎng)豬業(yè)中普遍流行，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了嚴重的損失�！ ”疚母鶕�(jù)作者到湖南某豬場進行種豬售后跟蹤服務時遇到的該場的產房及保育舍仔豬鏈球菌病發(fā)生率高的情況，從發(fā)病仔豬中分離純化出致病性鏈球菌，經滅活制成自家滅活苗在該場使用，結果該豬場豬鏈球菌病的發(fā)病率與死亡率均有明顯的下降，現(xiàn)將有關疫苗制備及試用情況介紹如下�！ ∫呙缰苽洹 �1、癥狀及病料的采集 產房仔豬或保育仔豬發(fā)病急，眼
結膜潮紅、流淚，出現(xiàn)不同程度的神經癥狀或前后肢關節(jié)腫大，關節(jié)患部柔軟，觸之有疼痛感，內含黃色膠樣液體或白色膿樣物�！ √暨x有典型神經癥狀及有關節(jié)炎癥狀的產房仔豬及保育仔豬，且要求在發(fā)病初期，沒有使用任何抗生素治療過，體溫升高在41℃以上的病豬多頭。剖檢發(fā)現(xiàn)病豬的腦膜、肺、肝、淋巴結有不同程度的出血點，
心包、腹腔有纖維素性滲出物。關節(jié)腔內充滿黃色膠樣液體，有的形成干
酪樣物附著在關節(jié)面。無菌采取病豬的腦、肺、肝、關節(jié)等病變部位的組織或關節(jié)液，進行細菌的分離和鑒定�！ �2、細菌的分離與鑒定 將采集的病料分別接種到血液瓊脂平板培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)12—24小時。結果可見有針頭或針尖大小的灰白色、濕潤、粘稠、周圍隆起的半透明菌落，有的菌株在馬血液瓊脂平板上有β—溶血，有的菌株在綿
羊血液瓊脂平板上菌落周圍有α—溶血。菌落直徑約0·5—1·0毫米，延長培養(yǎng)時間菌落很少增大或不增大。革蘭氏染色鏡檢：可見單個或成對排列的圓形或橢圓形革蘭氏陽性小球菌，有些菌株趨于桿狀。在培養(yǎng)基上很少形成鏈狀，而在肉湯中可形成長鏈狀�！ √羧∩鲜鼍浞謩e劃線培養(yǎng)于加入0·1%CAN(其作用是抑制除鏈球菌以外的其他細菌的生長)的瓊脂及“腦心湯”試管培養(yǎng)液分離提純培養(yǎng)。經鏡檢從腦、肺、肝、關節(jié)液分離的菌落中挑選出鏈球菌，然后進行細菌的鑒定�！ ∩磻簩ι鲜龇蛛x到的革蘭氏陽性球菌進一步做生化反應進行鑒定，能發(fā)酵
葡萄糖、蔗糖、乳糖、
麥芽糖、水楊苷、
海藻糖和菊糖，產酸不產氣;過氧化氫觸酶反應陰性�！ 游锝臃N：將經分離鑒定挑選出的4份(腦、肺、肝、關節(jié)液)鏈球菌培養(yǎng)液分別給4只家
兔腹腔注射，2毫升/只。接種后12—36小時內家兔全部死亡，且從死亡家兔的心、肝、脾等器官能分離到單純的鏈球菌，故可確定該病豬的腦神經炎及關節(jié)炎主要由鏈球菌感染所致�！ �3、增菌培養(yǎng)和滅活 將分離的4份純化的鏈球菌在無菌條件下每份分別接種10支試管培養(yǎng)液增菌培養(yǎng)6—12小時，然后把每支試管培養(yǎng)物接種到1瓶500毫升的“腦心湯”培養(yǎng)液中，37℃增菌培養(yǎng)18—24小時。 滅活：用0·3%體積(500毫升培養(yǎng)液中加入1·5毫升，下同)的福爾馬林滅活，福爾馬林要逐滴加入，并且要一邊加入一邊振蕩，然后放入培養(yǎng)箱中37℃恒溫培養(yǎng)6小時。為保證滅活效果，期間需要每2小時均勻振蕩一次，有條件的最好用振蕩培養(yǎng)箱37℃恒溫培養(yǎng)，制成滅活菌苗�！ �4、安全檢驗 取滅活的培養(yǎng)物在血液瓊脂中劃線37℃恒溫培養(yǎng)24小時，觀察有無菌落生長。經檢驗無菌生長后，進行混勻及分裝�；旌锨埃謩e將每一瓶培養(yǎng)物涂片鏡檢，看有無其它污染菌，若有，則廢棄。在無菌操作環(huán)境下，把腦、肺、肝、關節(jié)液的培養(yǎng)物按1∶1∶1∶1的比例混勻于大容器內，然后加入0·3%體積的濃度為10%的硫代
硫酸鈉中和培養(yǎng)物中的福爾馬林，這樣可以減少殘留福爾馬林對豬只的刺激性，同時減少因福爾馬林的長時間存在導致細菌的保護性抗原的降解或者抗原性丟失。同時，為了預防或殺滅污染菌，可在1000毫升混和物中加
慶大霉素100毫克，加入0·01%體積的硫柳貢防腐，后按需要分裝封存，于4℃冰箱中可保存3年有效�！ ∫呙缰坪煤�，選5頭仔豬，每頭豬分別注射5毫升自家苗，若30分鐘內出現(xiàn)如
嘔吐等異常癥狀者該批疫苗不能使用�！ ∈褂眯Ч �1、試驗材料和方法 從1999年3月開始，在該場中試用自家滅活苗，共選取60頭妊娠母豬，分別在1999年3月選30頭，2000年3月選30頭;每批都隨機分成2組，每組15頭，分別設為試驗組和商品苗對照組。試驗組母豬在產前5周及3周各用上述自制滅活疫苗免疫1次，每次3毫升/頭。試驗組母豬所產仔豬在3—5日齡及17—19日齡各免疫1次，首免1毫升/頭、二免2毫升/頭。商品苗對照組的母豬產前4周免疫一次，4頭份/頭，所產仔豬20—22日齡免疫1次(80日齡再免疫1次)，4頭份/頭。記錄65日齡前仔豬的生長狀況、腦神經炎及關節(jié)炎的發(fā)生率和死亡率�！ �2、試驗結果(見下表) 試驗組仔豬體況均勻，生長速度一致，出現(xiàn)神經癥狀及關節(jié)腫的病癥相對不明顯，而且對出現(xiàn)神經癥狀及關節(jié)腫的仔豬用
青霉素治療很容易治愈，仔豬死亡率低。對照組的仔豬個體差異大，神經癥狀及關節(jié)腫癥狀較明顯，用青霉素很難治愈，且體況消瘦，被毛粗亂，仔豬發(fā)病率及死亡率高�！ 》治黾坝懻摗 �1、由于豬舍結構所限及非全進全出的流水式生產，試驗組和對照組的豬在同一豬舍內飼養(yǎng)，會發(fā)生水平傳染，對試驗組結果可能有一定的影響。從試驗結果來看，試驗組比對照組仔豬的神經癥狀及關節(jié)腫的發(fā)生率顯著下降(P<0·01);試驗組比對照組仔豬的死亡率也顯著下降(P<0·01)，說明使用自制鏈球菌滅活疫苗效果很好。2001年1月起，該場開始在全場豬群
中使用自制鏈球菌滅活疫苗進行免疫，在跟蹤檢查中，抽查以往發(fā)病率最高的5月份，仔豬神經癥狀及關節(jié)炎的發(fā)生率為產房仔豬1·92%、保育仔豬1·11%，較以往用商品苗的同期大幅下降�！ �2、豬鏈球菌的血清型眾多，且不同血清型之間無交叉保護性。如果豬場在合理的免疫程序下使用了鏈球菌的商品疫苗仍不能有效地控制豬鏈球菌病的發(fā)生，那么，就應該考慮制備豬鏈球菌自家滅活疫苗進行豬鏈球菌病的預防，這往往會收到意想不到的效果�！ ≈苽滏溓蚓鷾缁钜呙绲年P鍵是能否分離出致病的鏈球菌，故必須從臨診癥狀、鏡檢、鏈球菌的生化反應及動物接種等方面入手分離出病原，作為制苗的菌種。此外，為了制得高濃度的鏈球菌滅活苗，用一般的瓊脂平板及營養(yǎng)肉湯是難以滿足鏈球菌大量生長需要的，本文中的“腦心湯”是由美國制造的，由它直接制成的肉湯及由它加瓊脂制成的瓊脂平板非常適合鏈球菌的生長，但它一般不易購得。筆者在制苗過程中曾用過如下配方，鏈球菌也可以生長良好，配方為胰蛋白胨5克、蛋白胨15克、酪蛋白胨3克、
葡萄糖5克、
胱氨酸(DL)0·2克、
氯化鈉4克、磷酸氫二鈉2·5克、瓊脂粉15克加入1000毫升蒸餾水中，制營養(yǎng)肉湯把瓊脂換成5克酵母浸膏即可�！ �3、擁擠，通風不良，高溫高濕，大幅溫度變化，2周齡以上差異的豬流動混合飼養(yǎng)都是易感豬群發(fā)生豬鏈球菌病的重要因素。對于豬鏈球菌病的預防，主要是加強產房及保育舍的管理工作。實施全進全出的管理方法;注意調入產房的臨產母豬的衛(wèi)生及消毒;注意保持產房及保育舍的清潔及干燥;避免在接產過程中斷
臍帶，剪牙、剪尾，剪耳號時經創(chuàng)傷感染鏈球菌;做好藥敏試驗選擇敏感藥物進行防治;選擇高品質的飼料以提高仔豬的日平均增重和飼料轉化率。只有綜合做好上述工作，再配合自家疫苗的免疫，這樣才能減少或控制豬場的鏈球菌病的發(fā)生率。
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做好免疫
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