針對仔豬輪狀病毒性
腹瀉的研究進(jìn)展
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仔豬輪狀病毒性腹瀉主要以腹瀉、厭食、
嘔吐、
脫水為特征，一旦暴發(fā)就可能連年發(fā)生，患病豬和隱性帶毒豬是該病的主要傳染源。Woode等在1974年首次從豬分離出輪狀病毒。中國于1982年從腹瀉豬糞便中分離到輪狀病毒。澳大利亞、美國、英國等先后都有關(guān)于該病毒的報(bào)道，目前該病在全世界普遍存在。我國輪狀病毒流行的特點(diǎn)是混合感染，由于飼養(yǎng)環(huán)境較差，人們往往認(rèn)為這一時(shí)期仔豬腹瀉是大腸埃希菌引發(fā)，其實(shí)輪狀病毒是其發(fā)病的一個(gè)重要誘因。輪狀病毒性腹瀉對人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展都有較大危害，在全球已成為一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問題。1 病原學(xué)1.1 病毒形態(tài)及分子特征輪狀病毒(Rotavirus，RV)屬呼腸病毒科，輪狀病毒屬，分為A，B，C，D和E和F6個(gè)群，在發(fā)生腹瀉的動(dòng)物中最常見的是A群，感染豬的RV有A群、B群、C群和E群。其中，A群稱為典型RV，其他則稱為非典型RV。純化的病毒在電鏡下略呈球狀，具有雙層衣殼，直徑為65nm～75nm，20面體對稱。病毒的中央為一個(gè)電子致密的六角形核心，直徑37nm～40nm，即芯髓；周圍有一電子透明層，殼粒由此向外呈輻射狀排列，構(gòu)成內(nèi)衣殼；外周為一層光滑薄膜構(gòu)成的外衣殼，厚約20nm。RV因其形似車輪狀結(jié)構(gòu)而得名。病毒顆粒在感染的糞樣和細(xì)胞培養(yǎng)物中以兩種形式存在，一種是含有完整外殼的實(shí)心光滑型顆粒，大約70nm～75nm，具有傳染性；另一種是不含外殼且僅含有內(nèi)殼的粗糙型顆粒，大約50nm～60nm。病毒體核心是由11個(gè)不連續(xù)的雙股正鏈RNA片段組成，除了片段11具有2個(gè)開放閱讀框外，其他的片段只有1個(gè)開放閱讀框。每一片段各編碼一種蛋白，包括6種結(jié)構(gòu)蛋白即VP1～VP4，VP6和VP7。VP1～VP3為芯髓蛋白，VP4和VP7為外衣殼蛋白，VP6為內(nèi)衣殼蛋白。在病毒侵入細(xì)胞的過程當(dāng)中VP4起到關(guān)鍵作用，VP4經(jīng)胰蛋白酶(Trypsin)裂解可產(chǎn)生VP5(60ku)和VP8(26ku)2個(gè)結(jié)構(gòu)部分，與病毒附著、聚集有重要關(guān)系，并能提高病毒感染性。研究表明，VP7具有穩(wěn)定VP4結(jié)構(gòu)的作用。此外，還有5種非結(jié)構(gòu)蛋白即NSP1～NSP5，其中NSP1，NSP2，NSP3，NSP5為RNA結(jié)合蛋白，與病毒的復(fù)制、合成和表達(dá)有關(guān)。NSP4是一種糖蛋白，與病毒粒子從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)出芽有關(guān)，在病毒的復(fù)制以及致病機(jī)理方面具有重要作用。NSP4的突變可以影響病毒的毒力。1.2 病毒分型利用聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)可將RV的11個(gè)雙鏈RNA片段分離，所形成的11條電泳帶可以分為4個(gè)區(qū)段，常見的人和動(dòng)物的電泳帶的排列位置為4∶2∶3∶2，統(tǒng)稱為A群，又叫典型RV。此外，以第10和11節(jié)段在聚丙烯酰胺凝膠電泳中的遷移率上的差異，A群RV又分長型和短型。其他統(tǒng)稱為非典型RV，分別為B，C，D，E，F(xiàn)和G群。RV屬于呼腸病毒科RV屬的A，B，C和E群。RV粒子表面共有3種抗原，即群抗原VP6、中和抗原VP7及血凝素抗原VP4。根據(jù)群抗原VP6可以分為不同的亞群，大多數(shù)動(dòng)物的A群RV為Ⅰ亞群；VP4和VP7在病原的檢測和產(chǎn)生中和抗體以及免疫性保護(hù)過程中具有重要意義，可根據(jù)VP4和VP7分為不同的血清型系統(tǒng)。根據(jù)VP4形成的血清型為P(Proteasesensitive)型，VP7形成的血清型叫G(Glycoprotein)型。RV不同血清型之間的交叉反應(yīng)性較差，根據(jù)RV的分子
流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，目前已知至少有18種P血清亞型和14個(gè)G血清亞型存在。在世界廣泛流行的A組RV主要有4種G和P血清型組合――G1P8，G2P4，G3P8和G4P8。1.3 培養(yǎng)特性RV于1968年由美國的MebusMS等首次從犢牛糞便中分離成功，1980年，美國的Waytt將人的Wa株首次利用非洲綠猴腎原代細(xì)胞培養(yǎng)成功。RV在體外不易培養(yǎng)，需要特殊培養(yǎng)條件，除A型RV外，其他RV的許多毒株迄今未能適應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)，A型RV分離的成功率為40%～70%。因此，只能通過感染易感動(dòng)物來分離和復(fù)制病毒，培養(yǎng)過程需加胰蛋白酶和胰凝乳酶等處理。黃旭雯等利用CV-1細(xì)胞增殖培養(yǎng)RV時(shí)發(fā)現(xiàn)，同時(shí)添加40mL/L的
雞血清和10μg/mL胰蛋白酶有利于RV的復(fù)制。此外，RV感染細(xì)胞具有特定的趨向性，在體內(nèi)只感染腸絨毛上皮細(xì)胞，在體外盡管可以吸附許多細(xì)胞，但是只感染腎或腸道上皮細(xì)胞來源的細(xì)胞。培養(yǎng)RV常用的細(xì)胞系為MA-104、AGMK、CV-1、MARC-145等，但最適合用MA-104培養(yǎng)。1.4 穩(wěn)定性RV對理化因素的作用有較強(qiáng)的抵抗力，糞便和乳汁中的病毒在18℃～20℃室溫中經(jīng)7個(gè)月仍有感染性，而蛋白水解酶如胰凝乳蛋白酶，能增強(qiáng)RV的感染性。耐乙醚、氯仿、去氧
膽酸鈉、次氯酸鹽和脂溶劑，對酸穩(wěn)定，pH3.5～10.0范圍內(nèi)病毒保持感染力。經(jīng)反復(fù)凍融，超聲波處理，以及37℃下1h仍不失活。但EDTA，EGTA等促溶劑及CaCl2、硫氯酸鉀等可使雙衣殼病毒粒子變?yōu)閱我職げ《玖Ｗ�，使芯髓部分的密度發(fā)生改變，病毒聚合酶的活性喪失而失去感染力。另外0.1g/L碘、10g/L次氯酸鈉、700mL/L酒精、臭氧、酚等可滅活病毒。2 仔豬輪狀病毒性腹瀉的流行現(xiàn)狀輪狀病毒感染(Rotavirusinfection)主要是多種幼齡動(dòng)物(包括仔豬、犢、羔、駒、犬及家禽在內(nèi))的一種急性腸道傳染病。各種動(dòng)物的RV都對各自的幼齡動(dòng)物呈現(xiàn)明顯的致病性，一旦發(fā)病后可能每年連續(xù)發(fā)生，病畜和隱性帶毒者是本病的傳染源。ElAttarL等試驗(yàn)結(jié)果表明，在適宜的條件下，感染某種動(dòng)物的輪狀病毒會因一種致病的適應(yīng)輪狀病毒給其他動(dòng)物帶來感染隱患，例如在犢牛和豬、人和豬之間。該病主要以厭食、嘔吐、腹瀉和脫水、體重減輕為特征，對人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展都有較大危害。1974年Woode等在英國首次報(bào)道豬的RV后，RV在豬中的傳播引起了許多國家的重視，接著澳大利亞、北愛爾蘭、美國、法國等均有RV引起仔豬腹瀉的報(bào)道。據(jù)報(bào)道，美國斷奶仔豬感染陽性率為80%，病死率為15%；當(dāng)有混合感染時(shí)，病死率更高。波蘭學(xué)者M(jìn)arkowska-Daniel等對11個(gè)大型豬場2周齡～10周齡腹瀉仔豬(斷乳前發(fā)病率為8%～15%)采集1230份血清和531份糞樣進(jìn)行RV抗體檢測及病毒分離，結(jié)果經(jīng)ELISA檢測有1214份血清為RV抗體陽性，169個(gè)糞樣為抗原陽性。選擇其中28份ELISA抗原陽性糞樣用MA-104細(xì)胞系進(jìn)行分毒，結(jié)果有18份(64.3%)可見到CPE反應(yīng)，免疫熒光和電鏡檢查則均為陽性，PAGE電泳測定有22份(79%)為陽性。英國報(bào)道1周齡～4周齡仔豬的發(fā)病率超過80%，病死率10%～30%，發(fā)病豬體重急劇下降10%～20%，需半個(gè)月甚至更長時(shí)間才能回復(fù)到正常生長速度，這是該病的特征，同時(shí)也說明該病在經(jīng)濟(jì)上的影響更為重要。加拿大DeweyC等研究了感染豬只的A群RV與飼養(yǎng)規(guī)模管理時(shí)發(fā)現(xiàn)，飼養(yǎng)規(guī)模大且斷奶較早的仔豬群易感染A群RV，陽性比率較高；集約化生產(chǎn)模式較持續(xù)流動(dòng)設(shè)施條件下飼養(yǎng)的仔豬，其A群RV陽性感染率其前者比后者高3.4倍。英國學(xué)者Kilion研究表明，RV與致病性大腸埃希菌混和感染時(shí)，由于二者在致病過程中相互促進(jìn)，所造成的危害要遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于二者之和，而且是仔豬斷奶后引發(fā)腹瀉的一個(gè)重要原因。BarmanNN等[18]對位于印度Assam地區(qū)的528份
豬血清樣品進(jìn)行了間接ELISA檢測，其中RV陽性率占51.1%，高于TGEV(39.4%)和PEDV(21.2%)，約13.6%的豬只血清樣品中含抗以上3種病毒的抗體。RV是豬病毒性腹瀉的主要病原之一，約占10%～15%，在美國豬病毒性腹瀉中由RV造成的損失僅次于TGEV，所以國外是非常重視的對RV的防制。中國自1982年從腹瀉豬糞便中分離到RV，證實(shí)豬RV感染在我國普遍存在，至今已有24年[。該病可以引起仔豬的死亡，成年豬的掉膘，飼料報(bào)酬的降低，增加人工費(fèi)和藥費(fèi)的開支等。李國平等用RV抗原酶標(biāo)診斷試劑盒對福建省福州、南平等地的部分豬場進(jìn)行了仔豬RV感染情況調(diào)查，結(jié)果顯示10日齡至斷奶仔豬的陽性率高達(dá)82.3%～91.7%。2003年冬季至2004年春季，上海一些規(guī)�；i場的生產(chǎn)母豬雖然已按程序進(jìn)行了豬流行性腹瀉和豬傳染性胃腸炎二聯(lián)苗免疫，但其產(chǎn)下的仔豬仍發(fā)生病毒性腹瀉，經(jīng)診斷為豬RV感染，造成很大損失。程健頻等于2002年10月對甘肅省莊浪縣7個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)90戶飼養(yǎng)的2100頭仔豬進(jìn)行了初步調(diào)查，發(fā)病仔豬1460頭，發(fā)病率達(dá)69.5%，其中環(huán)境溫度下降繼發(fā)大腸埃希菌病死亡690頭，死亡率47.8%；王玉春等1990年對國內(nèi)19個(gè)省共計(jì)121個(gè)豬場做血清學(xué)調(diào)查，未發(fā)現(xiàn)陰性豬群。
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寒冷季節(jié)多發(fā)
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吃好
初乳，做好保溫
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