公開(公告)號
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CN101092607A
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公開(公告)日
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2007.12.26
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申請(專利)號
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CN200710074498.6
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申請日期
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2007.05.17
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專利名稱
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一種從貼底生長的細(xì)胞系獲得細(xì)胞克隆球的方法
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主分類號
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C12N5/06(2006.01)I
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分類號
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C12N5/06(2006.01)I;C12N5/08(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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深圳職業(yè)技術(shù)學(xué)院
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發(fā)明(設(shè)計)人
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金 剛;代建國
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地址
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518055廣東省深圳市南山區(qū)西麗湖
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頒證日
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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深圳市維邦知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所
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代理人
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黃 莉
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國省代碼
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廣東;44
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主權(quán)項
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一種從貼底生長的細(xì)胞系獲得細(xì)胞克隆球的方法,其特征在于,其包括如下步驟: 步驟一、將細(xì)胞置于常規(guī)有血清培養(yǎng)基中進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng),讓細(xì)胞貼底生長; 步驟二、培養(yǎng)7~20天后,當(dāng)懸浮的細(xì)胞中,完整的單個細(xì)胞達(dá)到一定數(shù)量時,收集懸浮細(xì)胞; 步驟三、將收集的懸浮細(xì)胞離心,棄去上清液,再用HBSS液清洗剩余物(含有具有較強(qiáng)增殖能力的單個細(xì)胞); 步驟四、將清洗后的剩余物置于至少添加有生長因子的無血清培養(yǎng)基培養(yǎng); 步驟五、培養(yǎng)10~20天后,即可獲得直徑在50~100微米的克隆球,克隆球部分呈懸浮狀,部分為貼底生長,把懸浮的克隆球和貼底的克隆球及貼底細(xì)胞分開培養(yǎng),并定期更換培養(yǎng)基以維持培養(yǎng)基中有效成分的含量,培養(yǎng)瓶中即會持續(xù)不斷地生長出來新的克隆球。
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摘要
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本發(fā)明公開一種從貼底生長的細(xì)胞系獲得細(xì)胞克隆球的方法,包括如下步驟:將細(xì)胞置于常規(guī)有血清培養(yǎng)基中進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng),讓細(xì)胞貼底生長;培養(yǎng)7~20天后,收集懸浮細(xì)胞;離心處理懸浮細(xì)胞,棄去上清液,再用HBSS液清洗剩余物;將清洗后的剩余物置于至少添加有生長因子的無血清培養(yǎng)基培養(yǎng);培養(yǎng)10~20天后,即可獲得克隆球,把懸浮的克隆球分離出來單獨培養(yǎng),貼底的克隆球和貼底細(xì)胞仍在一起培養(yǎng),并定期更換培養(yǎng)基,即會持續(xù)不斷地生長出新的克隆球。本發(fā)明方法簡便,且不用消化酶,也不用機(jī)械方法制得單細(xì)胞懸液,可持續(xù)地獲得遺傳背景完全一致的干細(xì)胞克隆球;可廣泛應(yīng)用于干細(xì)胞理論研究、再生醫(yī)學(xué)、新藥開發(fā)等領(lǐng)域。
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國際公布
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