|
公開(kāi)(公告)號(hào)
|
CN101016564A
|
|
公開(kāi)(公告)日
|
2007.08.15
|
|
申請(qǐng)(專利)號(hào)
|
CN200610125372.2
|
|
申請(qǐng)日期
|
2006.12.08
|
|
專利名稱
|
一種檢測(cè)線粒體糖尿病的45個(gè)基因位點(diǎn)微陣列芯片
|
|
主分類號(hào)
|
C12Q1/68(2006.01)I
|
|
分類號(hào)
|
C12Q1/68(2006.01)I;C12N15/11(2006.01)I
|
|
分案原申請(qǐng)?zhí)? |
|
|
優(yōu)先權(quán)
|
|
|
申請(qǐng)(專利權(quán))人
|
武漢大學(xué)
|
|
發(fā)明(設(shè)計(jì))人
|
劉松梅;周 新;李 霞;鄭 芳;涂建成;湯冬玲;曲喜英;田艷麗;蔡春林
|
|
地址
|
430072湖北省武漢市武昌珞珈山
|
|
頒證日
|
|
|
國(guó)際申請(qǐng)
|
|
|
進(jìn)入國(guó)家日期
|
|
|
專利代理機(jī)構(gòu)
|
武漢宇晨專利事務(wù)所
|
|
代理人
|
王敏鋒
|
|
國(guó)省代碼
|
湖北;42
|
|
主權(quán)項(xiàng)
|
一種檢測(cè)線粒體糖尿病45個(gè)基因位點(diǎn)微陣列芯片，它包括下列步驟： A、以醛基玻片為載體； B、設(shè)計(jì)引物和探針：首先從MITOMAP、mtSNP、mtDB、PubMed、中國(guó)期刊網(wǎng)和重慶維普數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索與糖尿病的線粒體基因/mtDNA突變位點(diǎn)；其次以線粒體基因劍橋堿基序列/GenBank#J01415.0 gi：337188為序列；第三是采用Primer Premier 5.0和NCBI BLAST軟件，針對(duì)mtDNA 45個(gè)突變位點(diǎn)，設(shè)計(jì)特異性擴(kuò)增目的DNA序列引物；特異性野生型和突變型寡核苷酸探針，退火溫度為56.7℃～62℃，其5′端或3′端加載長(zhǎng)臂15T后修飾氨基基團(tuán)； C、芯片點(diǎn)陣布控：微陣列芯片為324個(gè)樣點(diǎn)組成的18行×18列的矩陣，包括監(jiān)控系統(tǒng)和檢測(cè)系統(tǒng)，監(jiān)控系統(tǒng)為：①芯片陰性對(duì)照，為探針稀釋液，pH 8.0，1×TE Buffer，布控在有公共野生型探針的位點(diǎn)處，點(diǎn)樣矩陣中，mtDNA 3200，3205與3206位點(diǎn)公用1條野生型探針，在mtDNA 3200和3205位點(diǎn)的突變型探針點(diǎn)樣處下方，點(diǎn)印陰性對(duì)照；②芯片陽(yáng)性對(duì)照，為mtDNA 3243和5178兩個(gè)位點(diǎn)的4條探針按1∶1∶1∶1比例混合的5μM溶液，布控在微陣列芯片的左邊3列，共54個(gè)陽(yáng)性對(duì)照樣點(diǎn)；③芯片平行對(duì)照，為各位點(diǎn)的5μM探針溶液平行點(diǎn)印3個(gè)點(diǎn)，在矩陣中mtDNA 1888位點(diǎn)的野生型探針和突變型探針各點(diǎn)印3個(gè)樣點(diǎn)，共6個(gè)樣點(diǎn)檢測(cè)1個(gè)基因位點(diǎn)；檢測(cè)系統(tǒng)由mtDNA 45個(gè)位點(diǎn)的野生型和突變型寡核苷酸探針布控的樣點(diǎn)組成；每條探針采用pH8.0的1×TE Buffer稀釋為5μM溶液，并點(diǎn)印3個(gè)平行點(diǎn)，共6個(gè)樣點(diǎn)檢測(cè)1個(gè)基因位點(diǎn)，45個(gè)基因位點(diǎn)從左到右順序排列； D、監(jiān)控系統(tǒng)與檢測(cè)系統(tǒng)的點(diǎn)陣布控：監(jiān)控系統(tǒng)與檢測(cè)系統(tǒng)的點(diǎn)陣布控在同一區(qū)域，采用Packard芯片點(diǎn)樣儀點(diǎn)印于醛基玻片上；室溫保濕固定48～72小時(shí)，4℃冰箱保存?zhèn)溆茫? 所述的特異性野生型和突變型寡核苷酸探針： 所述的目的DNA序列引物： 引物 編號(hào) 序列，5′→3′ 擴(kuò)增范圍 產(chǎn)物長(zhǎng)度 |
7 F：TCCAAAGACAACCATCATTCC R：GATTGATGAAAAGGCGGTTGA 14470-14944 475bp |
|
|
摘要
|
本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)線粒體糖尿病的45個(gè)基因位點(diǎn)微陣列芯片。其步驟是以醛基玻片為載體，其次是引物和探針設(shè)計(jì)，第三是芯片點(diǎn)陣布控，最后是監(jiān)控系統(tǒng)與檢測(cè)系統(tǒng)的點(diǎn)陣布控。監(jiān)控系統(tǒng)由堿基突變位點(diǎn)的陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照和平行對(duì)照組成；檢測(cè)系統(tǒng)為待檢的mtDNA 45個(gè)位點(diǎn)的野生型和突變型探針。每芯片含1～3個(gè)0.04cm2的點(diǎn)樣矩陣、每個(gè)矩陣90條探針、324個(gè)樣點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)操作流程簡(jiǎn)單，省時(shí)，成本低，僅需1次不對(duì)稱PCR擴(kuò)增和Cy5標(biāo)記、1次雜交反應(yīng)，即可檢測(cè)1～3份不同標(biāo)本的mtDNA 45個(gè)位點(diǎn)。適用于糖尿病患者和高危人群的檢測(cè)，有助于臨床特殊類型糖尿病的正確診斷和分類，早發(fā)現(xiàn)病人，早預(yù)防，早治療。
|
|
國(guó)際公布
|
|
