| 公開(公告)號 | CN1448507A |
| 公開(公告)日 | 2003.10.15 |
| 申請(專利)號 | CN02108299.5 |
| 申請日期 | 2002.03.29 |
| 專利名稱 | 基因重組人源銅鋅超氧化物歧化酶的制備工藝 |
| 主分類號 | C12N9/08 |
| 分類號 | C12N9/08;C07K1/16;C07K1/18 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 四平市科學技術研究院 |
| 發(fā)明(設計)人 | 董偉東;劉兆柯;路海源 |
| 地址 | 136000吉林省四平市師院南路1號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 四平市新時代專利事務所 |
| 代理人 | 孫國振 |
| 國省代碼 | 吉林;22 |
| 主權項 | 一種生物工程基因重組人源銅鋅超氧化物歧化酶的制備工藝，其特征是：(1)、挑取工程菌單菌落接種在含氨芐的LB培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)，然后接種到含AMP100μg/ml的LB培養(yǎng)基的三角瓶中，30℃、180轉(zhuǎn)/分，振蕩培養(yǎng)10小時，OD值達到1.0時，收集菌液；(2)、取上述菌液，以1∶10的比例，接種到含有AMP100μg/ml的改良M9培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，30℃培養(yǎng)6小時，OD值達2.5-3.0時，迅速升溫至42℃，熱激誘導表達，然后再培養(yǎng)3-4小時，離心收集菌體；(3)、取菌體，用0.9％的NaCl洗兩次，然后用PH7.8TES緩沖液懸浮菌體，冰浴條件下攪拌30分鐘，加入稀釋6倍的TES溶液，冰浴條件下攪拌40分鐘，離心取上清液，離心的菌體加TES溶液冷凍，取出速暖至冰水混合物狀，加入稀釋6倍的TES溶液，攪拌40分鐘，離心取上清液，將上述，上清液經(jīng)超濾濃縮，得粗酶液；(4)、粗酶液經(jīng)透析：DEAE-Sephadex-A50離子交換柱層析，其全部進入膠面后，再用PBS緩沖液進行梯度洗脫，收集目的蛋白峰溶液，再用Sephadex-200分子篩柱層析，收集含Cu·Zn-SOD酶的活力部分，用PH7.8PBS溶液洗脫，自動餾分收集器收集，冷凍、干燥。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種生物工程，基因重組人源銅鋅超氧化物歧化酶的制備工藝，其特征是首先進行工程菌發(fā)酵擴增，熱激誘導，收集菌體。經(jīng)緩沖液抽提、再經(jīng)離子交換、分子篩柱層析分離純化。本發(fā)明具有工藝流程簡單、SOD半衰期長、產(chǎn)量高、單位成本低等優(yōu)點，本產(chǎn)品可廣泛應用在化妝品、保健食品、醫(yī)療等領域。 |
| 國際公布 |
