| 公開(公告)號(hào) | CN1498274A |
| 公開(公告)日 | 2004.05.19 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN01813297.9 |
| 申請(qǐng)日期 | 2001.06.26 |
| 專利名稱 | 基于轉(zhuǎn)錄的核酸擴(kuò)增方法和組合物 |
| 主分類號(hào) | C12Q1/68 |
| 分類號(hào) | C12Q1/68 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 2000.6.26 US 60/213,908;2001.3.21 US 60/277,748 |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 紐亙技術(shù)公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | N·庫爾恩 |
| 地址 | 美國加利福尼亞 |
| 頒證日 | |
| 國際申請(qǐng) | PCT/US2001/020660 2001.6.26 |
| 進(jìn)入國家日期 | 2003.01.24 |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 北京市中咨律師事務(wù)所 |
| 代理人 | 黃革生;隗永良 |
| 國省代碼 | 美國;US |
| 主權(quán)項(xiàng) | 產(chǎn)生多拷貝目的核酸序列的方法，所述方法包括下列步驟：(a)將包含目的核酸序列的單鏈靶多核苷酸與第一引物雜交，其中所述第一引物為包含RNA部分和3′DNA部分的復(fù)合引物；(b)任選地將包含終止多核苷酸序列的多核苷酸與靶多核苷酸5′的區(qū)域雜交，其中所述靶多核苷酸5′的區(qū)域?yàn)橄鄬?duì)于第一引物與靶多核苷酸的雜交位點(diǎn)而言；(c)用DNA依賴的DNA聚合酶延伸第一引物，以產(chǎn)生包含第一引物延伸產(chǎn)物和靶多核苷酸的復(fù)合體；(d)使用從RNA/DNA雜合體中切除RNA的酶從第一引物延伸產(chǎn)物和靶多核苷酸復(fù)合體的復(fù)合引物上切除RNA部分，以使另一復(fù)合引物可與靶多核苷酸雜交，并通過鏈置換重復(fù)引物延伸，以產(chǎn)生置換的引物延伸產(chǎn)物；(e)雜交前啟動(dòng)子多核苷酸，其中所述前啟動(dòng)子多核苷酸包含前啟動(dòng)子并包含與置換的引物延伸產(chǎn)物在允許通過RNA聚合酶進(jìn)行轉(zhuǎn)錄的條件下雜交的區(qū)域，以便產(chǎn)生包含與置換的引物延伸產(chǎn)物有互補(bǔ)序列的RNA轉(zhuǎn)錄本；(f)將第二引物與步驟(e)的RNA轉(zhuǎn)錄本雜交；(g)用RNA依賴的DNA聚合酶延伸第二引物，以產(chǎn)生包含第二引物延伸產(chǎn)物和RNA轉(zhuǎn)錄本的復(fù)合體；(h)用從RNA/DNA雜合體中切除RNA的酶切除步驟(g)復(fù)合體中的RNA；(i)將單鏈第二引物延伸產(chǎn)物與前啟動(dòng)子多核苷酸雜交，其中前啟動(dòng)子多核苷酸包含前啟動(dòng)子并包含與單鏈第二引物延伸產(chǎn)物在允許通過RNA聚合酶進(jìn)行轉(zhuǎn)錄的條件下雜交的區(qū)域，從而產(chǎn)生包含目的序列的RNA轉(zhuǎn)錄本；由此產(chǎn)生多拷貝目的核酸序列。 |
| 摘要 | 公開了靶多核苷酸等溫指數(shù)級(jí)擴(kuò)增的方法。該方法應(yīng)用兩個(gè)轉(zhuǎn)錄組件，第一組件提供產(chǎn)生RNA轉(zhuǎn)錄本的線性擴(kuò)增，且第二組件提供進(jìn)一步的(通常為循環(huán)的)產(chǎn)生更多RNA轉(zhuǎn)錄本的擴(kuò)增。一方面，第一組件的擴(kuò)增基于復(fù)合引物。第二方面，第一組件的擴(kuò)增基于靶轉(zhuǎn)換，以產(chǎn)生包含啟動(dòng)子序列的引物延伸產(chǎn)物。在所有的方面中，第一轉(zhuǎn)錄組件的RNA轉(zhuǎn)錄本通過產(chǎn)生包含可啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄的雙鏈啟動(dòng)子區(qū)域的中間產(chǎn)物而進(jìn)行進(jìn)一步的擴(kuò)增。本發(fā)明還提供了用于實(shí)踐所述方法的組合物和試劑盒，并提供了使用擴(kuò)增結(jié)果的方法。 |
| 國際公布 | WO02/000938 英 2002.1.3 |
