公開(kāi)(公告)號(hào)
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CN1523113A
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公開(kāi)(公告)日
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2004.08.25
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申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào)
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CN03117329.2
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申請(qǐng)日期
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2003.02.20
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專(zhuān)利名稱(chēng)
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乙型肝炎病毒siRNA表達(dá)載體的構(gòu)建以及抗病毒治療應(yīng)用
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主分類(lèi)號(hào)
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C12N15/86
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分類(lèi)號(hào)
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C12N15/86;C12N15/11;C12N5/10;A61K48/00
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人
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重慶醫(yī)科大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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黃愛(ài)龍;唐霓;張秉強(qiáng);閻歌
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地址
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400010重慶市渝中區(qū)醫(yī)學(xué)院路1號(hào)
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專(zhuān)利代理機(jī)構(gòu)
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代理人
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國(guó)省代碼
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重慶;85
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主權(quán)項(xiàng)
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構(gòu)建三種靶向乙型肝炎病毒(HBV)基因序列的siRNA表達(dá)載體,其特征在于:本發(fā)明在構(gòu)建針對(duì)HBV基因的siRNA表達(dá)載體時(shí),根據(jù)siRNA的設(shè)計(jì)原則,分別選擇HBV包膜蛋白(MS)編碼區(qū)69nt-87nt,聚合酶(P)編碼區(qū)708nt-726nt,核心蛋白(C)編碼區(qū)2052nt-2070nt的核苷酸序列,設(shè)計(jì)相應(yīng)的siRNA序列,用BLAST軟件進(jìn)行同源分析證實(shí)為HBV高度保守序列后,化學(xué)合成單鏈寡核苷酸,體外經(jīng)退火形成雙鏈DNA,與真核表達(dá)載體pTZU6+1連接,酶切鑒定和序列測(cè)定分析表明成功構(gòu)建了三種靶向乙型肝炎病毒(HBV)基因序列的siRNA表達(dá)載體。
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摘要
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乙型肝炎病毒siRNA表達(dá)載體的構(gòu)建以及抗病毒治療應(yīng)用,本發(fā)明屬基因工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明根據(jù)siRNA的設(shè)計(jì)原則,分別選擇HBV包膜蛋白(MS)編碼區(qū)69nt-87nt,聚合酶(P)編碼區(qū)708nt-726nt,核心蛋白(C)編碼區(qū)2052nt-2070nt的核苷酸序列,設(shè)計(jì)相應(yīng)的siRNA序列,用BLAST軟件進(jìn)行同源分析證實(shí)為HBV高度保守序列后,化學(xué)合成單鏈寡核苷酸,體外經(jīng)退火形成雙鏈DNA,與真核表達(dá)載體pTZU6+1連接,酶切鑒定和序列測(cè)定分析表明成功構(gòu)建了三種靶向乙型肝炎病毒(HBV)基因序列的siRNA表達(dá)載體。上述表達(dá)載體通過(guò)陽(yáng)離子脂質(zhì)體介導(dǎo)與HBV真核表達(dá)載體pHBV共轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞HepG2后,采用免疫熒光和Abbott實(shí)驗(yàn)均證實(shí)HBV siRNA具有較強(qiáng)抑制病毒復(fù)制和表達(dá)的作用。
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國(guó)際公布
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